|
62 неионный детергент (твин-20) и иммунологически инертные белки (бычий сывороточный альбумин, казеин или желатины). Твин-20, как поверхностно активный реагент, препятствует неспецифической сорбции. Инертные белки, обладая большей по сравнению с иммуноглобулинами сорбционной способностью, блокируют свободные поверхности твердой фазы. В то же время предлагают этого избежать, или наряду с детергентом в промывочный раствор ввести хаотропные ионы типа С1 в высоких концентрациях. При выборе оптимального промывочного буфера, использовали: ФСБ pH 7,2 с 0,15М NaCl и 0,05% твин-20; ФСБ pH 7,2 с 0,15М NaCl, 0,05% твин-20 и 50% сыворотки КРС; ФСБ pH 7,2 с 0,5М NaCl и 0,1% твин-20; ФСБ pH 7,2 с 0,15М NaCl и 50% сыворотки КРС; ФСБ pH 7,2 с 0,15М NaCl , 0,1% твин-20 и 0,2% БСА. Результаты исследований представлены в таблице 1. На основании результатов сравнительной оценки в настоящей диагностической тест-системе был использован фосфатно-солевой буфер, pH 7,2, содержащий 0,5 М NaCl с 0,1% конечной концентрацией детергента твин-20, обеспечивающий специфичность иммуноферментного анализа. Специфичность диагностической тест-системы определяли по отсутствию реакции с антигенотрицательной культуральной жидкостью и с гетерологичными антигенами антигеном ИЛТ и ИБК. ч |
67 конъюгата). Для устранения неспецифических взаимодействий таких, как «твердая фаза-белок» и «белок-белок», используются промывочные буферные системы, включающие неионный детергент (твин-20) и иммунологически инертные белки (бычий сывороточный альбумин). Первый как поверхностно-активный реагент препятствует неспецифической сорбции, второй, обладая большей по сравнению с вирусным белком сорбционной способностью, блокирует свободные поверхности твердой фазы (В.Н. Вербов, 1988; Е.Н. Горбачев с соавт., 1988). Авторы предлагают вводить балластные белки в концентрации 1-2% в промывочные буферные системы. В то же время предлагают этого избежать, или наряду с детергентом в промывочный раствор ввести хаотропные ионы типа Ci в высоких концентрациях (В.Н. Вербов, 1988; Е.Н. Горбачев с соавт., 1988). При выборе оптимального промывочного буфера, использовали: ФБР pH 7,2-7,4 с 0,15М NaCI, ФБР pH 7,2-7,4 с 0,15М NaCI и 0,05% твин-20 и ФБР pH 7,2-7,4 с 0,5М NaCI с 0,1% твин-20. Результаты исследований представлены в табл. 1. На основании результатов сравнительной оценки в настоящей диагностической тест-системе был использован фосфатный буфер, содержащий 0,5М NaCI с 0,1% конечной концентрацией детергента твин-20, обеспечивающий специфичность иммуноферментного анализа. 3.2.2.6 Определение диагностического титра сыворотки в ИФА Для определения диагностического титра в ИФА очищенный парвовирусный антиген в стандартной концентрации, сорбировали на поверхности лунок полистироловых планшет в 0,0 IM чатрий-фосфатном буфере с 0,15 М хлорида натрия в течение 18 часов при температуре 4°С. Затем, начиная с разведения 1:10, методом шахматного титрования были раститрованы 20 сывороток из гусеводческих хозяйств, благополучных по вирусному энтериту гусей, 2 гипериммунные сыворотки |