|
паразитов на 100 полей зрения микроскопа (п.з.м.) в случае незначительного поражения. Параллельно выводили лейкоцитарную формулу по способу Шиллинга. Биохимические исследования были проведены по следующим показателям: общий белок и белковые фракции, ферментативная активность аминотрансфераз (АСТ и АЛТ). Определение количества общего белка проводили рефрактометрическим методом, рефрактометром Аббе, вычисление процента белка проводили по таблице Рейса. Белковые фракции определяли электрофоретичсски на пластинах ПААГ. Ферментативную активность аспартатаминотрансферазы (АС!') и аланинами нотрансферазы (АЛТ) в сыворотке крови определяли динитрофенилгидразиновым методом Райтмана-Френкеля. (1956). Расчёт активности ферментов проводили но калибровочному графику, для чего готовили ряд стандартных растворов пирувата натрия. Фотометрию проводили на ФЭК-60П в кювете шириной 10 мм при зелёном светофильтре. С целью изучения сущности патологических процессов при бабезиозе крупного рогатого скота и реакции организма на паразитирование возбудителя проводили патологоморфологические и гистологические исследования. Гистосрезы готовили из органов и тканей в парафине и окрашивали гемагоксилин-эозином. Срезы промывали под струёй водопроводной воды в течение шести часов, затем обезвоживали в 70 %-ном этаноле 8-12 часов, в 96%ном этаноле 8-12 часов и в заключение, в абсолютном этаноле в две смены по 3-6 часов. После обезвоживания в спиртах фиксированные кусочки выдерживали в смеси абсолютного спирта с хлороформом (а-а) в течение 6-12 часов, затем тоже время в чистом хлороформе, после чего их помещали в хлороформпарафин (1:1) при температуре 35-40°С на 2-3 часа, затем па 1-2,5 часа в парафин 1 при температуре 54-55° С и на 1-1,5 часа в парафин 2 при той же температуре. 47 |
72 Клинически животных обследовали по следующей схеме: общее состояние животного, температура тела, состояние сердечно-сосудистой системы, органов дыхания, желудочно-кишечного канала, слизистых оболочек. Температуру тела измеряли, как правило, дважды утром и вечером на протяжении всего периода наблюдения. Контрольных животных обследовали одновременно с опытными в течение всего периода исследований. Возрастной состав у контрольных и опытных животных был одинаковый. Гематологические и биохимические исследования проводили в динамике инвазии. Количество эритроцитов и лейкоцитов определяли в 1 мкл по общепринятой методике в камере Горяева, содержание гемоглобина определяли колориметрическим методом по Сали. С целью обнаружения сроков появления бабезий в крови животных и изучения динамики паразитемии из периферической крови животных ежедневно готовили мазки, которые фиксировали метиловым спиртом в течение 3-5 минут и окрашивали по Романовскому-Гимза. Микроскопирование проводили под иммерсионной системой микроскопа аМБР-З. Интенсивность паразитемии выражали в процентах путём учёта поражённых эритроцитов к общему числу эритроцитов, если их количество было более 1 %, или в численном выражении паразитов па 100 полей зрения микроскопа (п.з.м.) в случае незначительного поражения. Параллельно выводили лейкоцитарную формулу по способу Шиллинга. Биохимические исследования были проведены но следующим показателям: общий белок и белковые фракции, ферментативная активность аминотрансфераз (АСТ и АЛТ). Определение количества общего белка проводили рефрактометрическим методом, рефрактометром Аббе, вычисление процента белка проводили но таблице Рейса. Белковые фракции определяли электрофоретически на пластинах ПААГ. 73 Ферментативную активность аспартатаминотрансферазы (АСТ) и аланинаминогрансферазы (АЛТ) в сыворотке крови определяли ди нитрофенил гидразиновым методом Райтмана-Френкеля. (1956). Расчёт активности ферментов проводили по калибровочному 1-рафику, для чего готовили ряд стандартных растворов пиру вата натрия. Фотометрию проводили на ФЭК-60П в кювете шириной 10 мм при зелёном светофильтре. С целью изучения сущности патологических процессов при бабезиозе крупного рогатого скота и реакции организма на паразитирование возбудителя проводили патологоморфологическис и гистологические исследования. Гистосрезы готовили из органов и тканей в парафине и окрашивали гематоксилин-эозином. Срезы промывали под струёй водопроводной воды в течение шести часов, затем обезвоживали в 70 %-ном этаноле 8-12 часов, в 96%-ном этаноле 8-12 часов и в заключение, в абсолютном этаноле в две смены по 3-6 часов. После обезвоживания в спиртах фиксированные кусочки выдерживали в смеси абсолютного спирта с хлороформом (а-а) в течение 6-12 часов, затем тоже время в чистом хлороформе, после чего их помещали в хлороформпарафин (1:1) при температуре 35-40°С на 2-3 часа, затем на 1-2,5 часа в парафин 1 при температуре 54-55° С и на 1-1,5 часа в парафин 2 при той же температуре. После этого кусочки помещали в формочки из фольги, заливали чистым парафином и охлаждали в воде. В заключение парафин с кусочками извлекали из формочек, вырезали блоки, которые наклеивали на колодки. Парафиновые гистосрезы готовили на роторном микротоме. Для депарафинирования срезы проводили через три ксилола, спирты (два 96%-ых и один 70%ый) по 5-10 минут в каждом и промывали проточной водой в течение 1-5 минут. Из воды гистосрезы помещали на 15 минут в гематоксилин, после чего промывали в проточной воде 3-5 минут. После этого срезы окрашивали в течение 10 мин эозином и промывали проточной водой 1-2 мин. Обезвоживание и дифференцировку после эозина проводили проводкой через 70 %-ный спирт от 155 2.2.2.4* Патологоморфологические изменении при бабезиозе крупного рогатого скота Для оценки характера морфологических изменений органов и систем организма при бабезиозе крупного рогатого скота и реакции организма на паразитирование возбудителя, а также для более полного изучения патогенеза заболевания, мы проводили патологоморфологические и гистологические исследования сердца, лёгких, печени, почек, селезёнки, головного мозга, а также лимфатических узлов и желудочно-кишечного канала. Кроме того, с целью изучения проявления гемосидероза гистологические срезы мы окрашивали по методу Перлса. Патологический материал был собран от 15 голов крупного рогатого скота, павших от бабезиоза. В целом патолого-анатомическая картина бабезиоза характеризовалась желтухой и анемией, а также дегенеративно-воспалительными изменениями внутренних органов. При этом в зависимости от тяжести и длительности течения инвазии полнота проявления и степень выраженности этих признаков варьировали. При вскрытии во всех случаях отмечали анемию и желтушность видимых слизистых оболочек, подкожной клетчатки, межмышечной соединительной ткани, сухожилий, фасций, серозных покровов брюшной и грудной полостей, сальника. Скелетные мышцы дряблые, бледно-красного цвета с желтушным оттенком. Гистологические изменения в мышцах характеризовались набуханием некоторых мышечных волокон, а также сглаженностью поперечно-полосатой исчерченности. В грудной и брюшной полостях наблюдали наличие прозрачного или мутноватого серозного транссудата светло-жёлтого или красно-оранжевого цвета. |