После этого кусочки помещали в формочки из фольги, заливали чистым парафином и охлаждали в воде. В заключение парафин с кусочками извлекали из формочек, вырезали блоки, которые наклеивали на колодки. Парафиновые гистосрезы готовили на роторном микротоме. Для депарафинирования срезы проводили через три ксилола, спирты (два 96%-ых и один 70%-ый) по 5-10 минут в каждом и промывали проточной водой в течение 1-5 минут. Из воды гистосрезы помещали на 15 минут в гематоксилин, после чего промывали в проточной воде 3-5 минут. После этого срезы окрашивали в течение 10 мин эозином и промывали проточной водой 1-2 мим. Обезвоживание и дифференцировку после эозина проводили проводкой через 70 %-ный спирт от 30 сек до 1-3 мин и два 96 %-ных спирта в течение этого же времени. Для просветления гистосрезы помещали в две последовательные порции карболксилола на 5-10 мин в каждую и в заключение для промывания по 5-10 мин в три последовательные порции ксилола. Из ксилола гистосрезы переносили на предметное стекло и заключали в бальзам, на поверхность которого клали покровное стекло. В готовых препаратах ядра клеток окрашиваются гематоксилином в тёмно-синий цвет, а цитоплазма и межклеточное вещество эозином в розовый. С целью выявления отложения гсмосидерина в органах гистосрезы окрашивали по Перлсу, докрашивание проводили эозином в течение 1 -2 мин. При испытании химических препаратов для борьбы с бабезиозом их эффективность оценивали по исчезновению клинических признаков заболевания, динамике температурной и паразитарной реакций, а также по результатам гематологических и биохимических исследований. Эффективность обработок крупного рогатого скота акарицидными препаратами определяли по отсутствию иксодовых клешей на животных, учитывая сроки отпадения клещей. Статистическую обработку полученных экспериментальных данных проводили с использованием общепринятых методов математического анализа по 48 |
73 Ферментативную активность аспартатаминотрансферазы (АСТ) и аланинаминогрансферазы (АЛТ) в сыворотке крови определяли ди нитрофенил гидразиновым методом Райтмана-Френкеля. (1956). Расчёт активности ферментов проводили по калибровочному 1-рафику, для чего готовили ряд стандартных растворов пиру вата натрия. Фотометрию проводили на ФЭК-60П в кювете шириной 10 мм при зелёном светофильтре. С целью изучения сущности патологических процессов при бабезиозе крупного рогатого скота и реакции организма на паразитирование возбудителя проводили патологоморфологическис и гистологические исследования. Гистосрезы готовили из органов и тканей в парафине и окрашивали гематоксилин-эозином. Срезы промывали под струёй водопроводной воды в течение шести часов, затем обезвоживали в 70 %-ном этаноле 8-12 часов, в 96%-ном этаноле 8-12 часов и в заключение, в абсолютном этаноле в две смены по 3-6 часов. После обезвоживания в спиртах фиксированные кусочки выдерживали в смеси абсолютного спирта с хлороформом (а-а) в течение 6-12 часов, затем тоже время в чистом хлороформе, после чего их помещали в хлороформпарафин (1:1) при температуре 35-40°С на 2-3 часа, затем на 1-2,5 часа в парафин 1 при температуре 54-55° С и на 1-1,5 часа в парафин 2 при той же температуре. После этого кусочки помещали в формочки из фольги, заливали чистым парафином и охлаждали в воде. В заключение парафин с кусочками извлекали из формочек, вырезали блоки, которые наклеивали на колодки. Парафиновые гистосрезы готовили на роторном микротоме. Для депарафинирования срезы проводили через три ксилола, спирты (два 96%-ых и один 70%ый) по 5-10 минут в каждом и промывали проточной водой в течение 1-5 минут. Из воды гистосрезы помещали на 15 минут в гематоксилин, после чего промывали в проточной воде 3-5 минут. После этого срезы окрашивали в течение 10 мин эозином и промывали проточной водой 1-2 мин. Обезвоживание и дифференцировку после эозина проводили проводкой через 70 %-ный спирт от 74 30 сек до 1-3 мин и два 96 %-иых спирта в течение этого же времени. Для просветления гистосрезы помещали в две последовательные порции карболксилола на 5-10 мин в каждую и в заключение для промывания по 5-10 мин в три последовательные порции ксилола. Из ксилола гистосрезы переносили на предметное стекло и заключали в бальзам, на поверхность которого клали покровное стекло. В готовых препаратах ядра клеток окрашиваются гематоксилином в тёмно-синий цвет, а цитоплазма и межклеточное вещество эозином в розовый. С целью выявления отложения гемосидерина в органах гистосрезы окрашивали по Перлсу, докрашивание проводили эозином в течение 1-2 мин. 11ри испытании химических препаратов для борьбы с бабезиозом их эффективность оценивали по исчезновению клинических признаков заболевания, динамике температурной и паразитарной реакций, а также по результатам гематологических и биохимических исследований. Эффективность обработок крупного рогатого скота акарицидными препаратами определяли по отсутствию иксодовых клещей на животных, учитывая сроки отпадения клещей. Статистическую обработку полученных экспериментальных данных проводили с использованием общепринятых методов математического анализа по Стыоденту с вычислением средних арифметических ошибок и определения достоверности полученных показателей. Некоторые методики, применяемые для изучения отдельных вопросов, подробно изложены в соответствующих разделах собственных исследований. |