|
введение ацетилхолина (40 мкг/кг) [279] и нитропруссида натрия (30 мкг/кг) [66]. 2.3. Проведение миокардиальныйх проб в острых экспериментах на наркотизированных крысах. Исследование сократимости миокарда после моделирования патологии проводили у наркотизированных крыс, находящихся на управляемом дыхании. Полость левого желудочка зондировали иглой через верхушку сердца и посредством датчика P23ID «Gould», США, АЦП L-154 и компьютерной программы «Bioshell» регистрировали показатели кардиогемодинамики (левожелудочковое давление (ЛЖД), максимальную скорость сокращения (+dp/dt max), максимальную скорость расслабления (-dp/dt max), частоту сердечных сокращений (ЧСС) и интенсивность функционирования структур (ИФС) (произведение частоты сердечных сокращений и давления, развиваемого левым желудочком (мм рт. ст. х уд. мин) [74, 83, 84]. Для оценки функциональных возможностей миокарда у животных проводили нагрузочные пробы в представленной последовательности: 1. Проба на адренореактивность (внутривенное одномоментное введение раствора адреналина гидрохлорида Г10°моль/л, из расчёта 0,1 мл на 100 г) [74, 83, 84]. 2. Нагрузка сопротивлением (пережатие восходящей аорты на30 сек [74, 83, 84]. 3. 3 минутную гипоксию [115, 117]. 2.4. Биохимические маркеры эндотелиальной дисфункции1 Нами использована модификация метода определения стабильных метаболитов NO, позволяющая после депротеинизации сыворотки крови проводить одноэтапное количественное определение суммарных нитратов и нитритов [102]. Принцип метода заключается в одновременном восстановлении нитратов в нитриты в присутствии хлористого ванадия и реакции диазотирования с последующим развитием окраски, интенсивность которой определяли спектрофотометрически при длине волны 540 нм. Анализ 100 мкл де38 |
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 2.1. Моделирование L-NAME-нндуццрованного дефицита оксида азота и оценка эндотелийзависимых и эндотелии независимых сосудистых реакций Опыты проводились на белых, крысах-самцах линии Wistar массой 250300 г. N-HHTpo-L-apniHHii метиловый эфир (L-NAME) вводился ежедневно один раз в сутки, внутрибрюшинно, в дозе 25 мг/кг. На 7 день от начала эксперимента под наркозом (этаминал-натрия 50 мг/кг) вводили катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей, болюсное введение фармакологических агентов осуществляли в правую бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) измеряли непрерывно посредством датчика и компьютерной профаммы “Biosheir. Функциональные пробы: внутривенное введение ацетилхолина (40 мкг/кг) [210] и нитропруссида натрия (30 мкг/кг) [25]. 2.2. Проведение функциональных проб в острых экспериментах на наркотизированных крысах Исследование сократимости миокарда после моделирования патологии проводили у наркотизированных крыс, находящихся на управляемом дыхании. Полость левого желудочка зондировали иглой через верхушку сердца и посредством датчика P23ID «Gould», США, АЦП L-154 и компьютерной программы «Bioshell» регистрировали показатели кардиогемодинамики (левожелудочковое давление (ЛЖД), максимальную скорость сокращения (+dp/dt max), максимальную скорость расслабления (-dp/dt max), частоту сердечных сокращений (ЧСС) и интенсивность функционирования структур (ИФС) (произведение частоты сердечных сокращений и давления, развиваемого левым желудочком (мм рт. ст. х уд. мин) [34, 43, 44]. Для оценки функциональных возможностей миокарда у животных проводили нагрузочные пробы в представленной последовательности: 28 1. Нагрузка объёмом (внутривенное одномоментное введение0,9 % раствора NaCl, из расчёта 0,4 мл на 100 г) [34, 43 44]. 2. Проба на адрснореактивность (внутривенное одномоментное введение раствора адреналина гидрохлорида Г10'5моль/л, из расчёта 0,1 мл на 100 г) [34, 43 44]. 3. Нагрузка сопротивлением (пережатие восходящей аорты на 30 сек [34, 43 44]. 4. 3 минутную гипоксию [85, 87]. 2.3. Биохимические маркеры эндотелиальной дисфункции 1 Нами использована модификация метода определения стабильных метаболитов NO, позволяющая после депротеинизации сыворотки крови проводить одноэтапное количественное определение суммарных нитратов и нитритов [69]. Принцип метода заключается в одновременном восстановлении нитратов в нитриты в присутствии хлористого ванадия и реакции диазотирования с последующим развитием окраски, интенсивность которой определяли спектрофотометрически при длине волны 540 нм. Анализ 100 мкл депротеинизироваиной сыворотки проводили в 96 луночных планшетах с плоским дном. Чувствительность метода на приборе Labsystems Multiskan МСС/340 составляет 1,7 мкМ. Для колориметрического определения нитритиона использовали реактив Грисса, состоящий из равных частей раствора I (0,05% раствор N-нафтилэтилендиамина в воде) и раствора II (1% раствор сульфаниламида в 30% уксусной кислоте) [69]. Оба раствора хранятся в темноте при температуре 4°С в течение нескольких месяцев. Для приготов1 Биохимические исследования показателей Total NO и активности NOсинтазы проведены в соответствии с договором (предмет договора «Биохимическое определение маркёров функционального состояния эндотелия», № 15/12 от 27 декабря) о научно-техническом сотрудничестве между КГМУ и Государственным учреждением «Государственный Научноисследовательский центр профилактической медицины М3 РФ (ГНИЦ ИМ М3 РФ)», г. Москва на базе лаборатории под руководством профессора В А. Метельской, за что выражаем сотрудникам глубокую благодарность. 29 |