|
49 Морфометрия тканевых структур проводилась при помощи окулярмикрометра МОВ-1-15х на светооптических микроскопах "Люмам-1-2", МБИ-15 и МБС-10 в соответствии с общепринятыми требованиями (Катинас Г. С., Полонский Ю. 3., 1970; Автандилов Г. Г., 1981,2002). Характеристика морфофункционального состояния кости и прилежащих мягких тканей складывалась из суммарной оценки признаков, наблюдаемых при визуальном изучении гистологических препаратов и количественных методов исследования. Оценка синтетической активности клеток производилась по их морфометрическим показателям: 1) площади фибробластов и остеобластов, расположенных в периосте; 2) площади остеоцитов в компактном веществе. Для оценки площади жировой ткани измерялся диаметр липоцитов в костномозговом канале (Автандилов Г. Г., 1990). Для характеристики состояния костной ткани в целом, производились измерения толщины костных пластинок, подсчитывались коэффициенты: 1) периостальный (ПКФТ), определяемый отношением толщины клеточного (остеогенного) слоя периоста к толщине его волокнистого слоя; 2) диафизарный (ДКФТ) отношение толщины компактного вещества кости к радиусу костномозгового канала (Раимова Э.Ш., 1999). 2.2.4 Иммунологическое обследование Иммунологическое обследование включало определение в крови Ти Влимфоцитов как в экспериментальной, так и в клинической части работы. Лимфоциты выделяли общепринятыми методами в градиенте плотности фиколла верографина (Воут А., 1974). Определение числа Тклеток проводили методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК) по М.УошЗа! ст а1. (1972) в модификации Р.В. Петрова и соавт. (1984). В-лимфоцитьт определяли по их способности образовывать спонтанные розетки эритроцитами мыши (ЕМ-РОК). За розеткообразующую |
49 2.2.3 Морфологические исследования. Для световой микроскопии регенерат большеберцовой кости крыс и прилежащие участки костной ткани фиксировали в 10% нейтральном формалине с последующей декальцинацией в течение 7 дней азотной кислотой, обрабатывали в спиртах в возрастающих концентрациях, заключали в парафин, целлоидин и изготавливали продольные и поперечные срезы, окрашивали гемотоксилином и эозином, пикрофуксином но ВанГизон согласно общепринятым методикам (Подрушняк Е.П., Суслов Е.И., 1975; Волкова О.В., Елецкий Ю.К., 1982; Хмельницкий О.К. и др., 1983). Для оценки пролиферативной активности остеогенных клеток , (остеобластов периоста и периваскулярных клеток расположенных вокруг сосудов Гаверсовых каналов), а так же количества остеоцитов и липоцитов, определяли их количество на стандарте. Причём, учитывая то, что в периосте делятся только преостеобласты с последующим переходом их в остеобласты, мы подсчитывали общее количество этих клеток, но описывали этот процесс как пролиферативную активность остеобластов. Оценка синтетической активности клеток производилась по их морфометрическим показателям: 1) площади фибробластов и остеобластов, I расположенных в периосте; 2) площади остеоцитов в компактном веществе. Для оценки площади жировой ткани измерялся диаметр липоцитов в костномозговом канале (Автандилов Г. Г., 1990). Для характеристики состояния костной ткани в целом, производились измерения толщины костных пластинок, подсчитывались коэффициенты: 1) периостальный (ПКФТ), определяемый отношением толщины клеточного (остеогенного) слоя периоста к толщине его волокнистого слоя; 2) регенерат большеберцовой кости крыс, а так же участок костной ткани, приближённый к зоне травмы. 50 диафизарный (ДКФТ) отношение толщины компактного вещества кости к радиусу костномозгового канала (Раимова Э.Ш., 1999). 2.2.4 Иммунологическое обследование Иммунологическое обследование включало определение в крови 1'и Влимфоцитов как в экспериментальной, так и в клинической части работы. 1 Лимфоциты выделяли общепринятыми методами в градиенте плотности фиколла верографина (Воут А., 1974). Определение числа Тклеток проводили методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК) по М.УопсЫ е! а1. (1972) в модификации Р.В. Петрова и соавт. (1984). В-лимфоциты определяли по их способности образовывать спонтанные розетки эритроцитами мыши (ЕМ-РОК). За розеткообразующую клетку принимали лимфоцит с прилипшими к нему тремя, или более чужеродными эритроцитами. «Нулевые» клетки вычисляли арифметическим путем. Содержание лимфоцитов в 1мл крови принимали за 100% и от этого количества отнимали процентное содержание Ти Влимфоцитов. Остаток составляли «нулевые клетки» (%). Для идентификации субпопуляции Тлимфоцитов (Т-хелперы и Т-супрессорьт) использовали спонтанные розеточные тесты с теофиллином (Петров Р. В. и др., 1984). 2.3 Клинические исследования 2.3.1 Характеристика групп больных. За периоде 1996 по 2003 год, включительно, в Чуйскую объединенную I областную больницу, а ныне Аламудунскую территориальную больницу, г. Бишкек с закрытым переломом костей голени поступило 145 больных из них 47 женщин и 98 мужчин (Табл.2.2). |