|
98 ридостином (24 мг внутримышечно). Средний возраст больных составил 35,5 лет; возрастные границы от 21 до 52 лет (табл. 6 ). Стадию злокачественного процесса устанавливали по результатам полного клинического обследования, а также после гистологического исследования операционного материала. По гистологической структуре опухоли всех больных 4 групп были однородны: в 100% случаев имел место плоскоклеточный рак шейки матки. Распределение больных различных групп по стадиям при раке шейки матки представлено в таблице 7. Всем больным (во 2-4 группах на 7-9 сутки после завершения неоадъювантной терапии) проводили хирургическое вмешательство в объеме расширенной экстирпации матки в модификации Вертгейма [45]. 2.2.4. Парапульмонарные лимфатические узлы Для исследования особенностей регенерации лимфатических узлов после полихимиотерапии злокачественной опухоли использовали 7 узлов, удаленных из области ворот легких у пациентов во время операции пульмонэктомии при раке легкого в Новосибирском городском онкологическом диспансере. Метастазов опухоли в исследуемых лимфатических узлах не было. 2.3. Морфологические методы исследования и статистическая обработка полученных данных Экспериментальный материал (нижние брыжеечные и общие подвздошные) лимфатические узлы фиксировали в 4% растворе параформальдегида на фосфатном буфере (pH 7,4) не менее 24 часов, обезвоживали в серии этанола возрастающей концентрации, просветляли в ксилоле и заключали в парафин. Срезы толщиной 5 мкм окрашивали гематоксилином и эозином и по Романовскому [83, 137, 192, 234]. Для исследования клинического морфологического материала (подмы |
79 жает сохранять приоритет одного из основных инструментов для практической медицины и ученых различных специальностей (Бредбери С.Д. и др,, 1992). Тело матки, фрагменты тонкой и толстой кишки крыс, забранные на расстоянии 5-7 см от слепой кишки, Пеперовы бляшки, иижиие брыжеечные и общие подвздошные (nodi lymphatic! iliaci communes) лимфатические узлы фиксировали в 4% растворе параформальдегида на фосфатном буфере (pH 7,4) не менее 24 часов, обезвоживали в серии этанола возрастающей конце!пграции, просветляли в ксилоле и заключали в парафин. Срезы толщиной 5 мкм окрашивали гематоксилином и эозином и по Романовскому (Пирс Э., 1964; Елисеев В.Г. и др., 1967; Лилли Р., 1969; Саркисов Д.С., Перов Ю.Л., 1996). Кроме этого, из замороженных иараиульмонарных лимфатических узлов namieirroB готовили криостатные срезы толщиной 4-5 мкм, высушивали на воздухе в течение 30-60 мин., фиксировали в метаноле 10 мин. при -20°С п трижды по 5 мин. промывали в фосфатном буфере. Далее срезы окрашивали airm-CD38 аггштсламн непрямым иммунопсроксидазным или, как более специфичным, непрямым стрсптавцщш-бнотшювым методом. R обоих случаях использовали набор реагентов "Dako reagents kit" (Dako; Дания): Непрямая иммунопсроксидазная реакция: 1. Иинкубация с раствором перекиси водорода (Dako) 30 мин. для подавления эндопсрокс!глазной активности. 2. Промывание буфером Dako (3 раза по 5 мин,). 3. Инкубация с анти-СШ8 мышиными антителами (Dako) в течение 30 мин. ro влажной камере. 4. Промывание буфером Dako (3 раза по 5 мин.). 5. Инкубация вторыми антителами (goat anti mouse/rabbit, Dako), меченными иероксидазой, во влажной камере в течение 30 мин. при 37°С. 6. Промывание буфером Dako (3 раза по 5 мин.). 7. Визуализация продуктов реакции на срезах 3,3-днамидобетиднном, как субстратом для нерокендазы, в течение 1-10 мин. 8. Промывание фосфатным буфером для остановки реакции. |