|
91 кипящей водяной бане 20 минут. После пятиминутного охлаждения в проточной воде пробы фотокалориметрировали, Расчет вели по калибровочной кривой. Для стабилизации и консервации полученной крови применяли гепарин фирмы» Биохеми (Вена/Австрия, содержащий 25тыс.ед\мл. Контрольные убой подопытных животных, органометрическое, гистологическое, гистохимическое и электронномикроскопическое исследования Контрольные убой телок (по три головы каждого возраста) проводили в 6, 9, 12, 15 и 18-месяцев в убойном цехе БАЗ по общепринятой методике ВИЖа (Томмэ, 1956). При этом определяли размеры, массу органов и тканей и отбирали образцы для дальнейших исследований. Материал, зафиксированный в жидкости Карнуа или в 10% растворе нейтрального формалина, обезвоживали и заливали в парафин по схеме Г. А. Меркулова (1969). С помощью роторного микротома получали срезы толщиной 5-6 мкм и после депарафинирования окрашивали их гематоксилином Майера и эозином, паноптическим методом по Pappenheim (1912), по Романовскому Гимзе (Меркулов, 1969). Коллагеновые волокна выявляли по ван Гизону, Маллори, дезоксирибонуклеопротеиды (ДНП) и рибонуклеопротеиды (РНП) Einarson (1951), Brachet (1953), Felgen, Rossenbec (1924), гликоген и нейтральные гликозаминогликаны по А. Л. Шабадашу (1949), кислые гликозаминоглифориканы по Н. Steedman (1950). |
40 ределяли размеры и массу органов и тканей. Материал, зафиксированный в жидкости Карнуа или в 10% растворе нейтрального формалина, обезвоживали и заливали в парафин по схеме Г. А. Меркулова (1969). С помощью роторного микротома получали срезы толщиной 5-6 мкм и после депарафинирования окрашивали их гематоксилином Майера и эозином, паноптическим методом по Pappenheim (1912), по Романовскому Гимзе (Меркулов, 1969). Коллагеновые волокна выявляли по ван Гизону, Маллори, дезоксирибонуклеопротеиды (ДНП) и рибонуклеопротеиды (РНП) Einarson (1951), Brachet (1953), Felgen & Rossenbec (1924), гликоген и нейтральные гликозаминогликаны по А. Л. Шабадашу (1949), кислые гликозаминогликаны по Н. Steedman (1950). Из материала, фиксированного в формалине, срезы получали на замораживающем микротоме и окрашивали Суданом черным В по Лизону, Суданом III по Дадди (Кононский, 1976), импегнировали солями серебра по Билыновскому Грос (Меркулов, 1969). Из пластинок органов, фиксированных в жидком азоте, в криостате получали срезы толщиной 10 мкм и в них по прописям Э. Пирса (1962) и Р. Лилли (1969) выявляли активность дегидрогеназ сукцината (СДГ), лактата (ЛДГ), никотинамидадениндинуклеотида восстановленного (НАДН2ДГ), никотинамидадениндинуклеотидфосфата восстановленного (НАДФН2ДГ), щелочной и кислой фосфатаз по Берстону в модификации Лойда и др. (1982). Электронную микроскопию проводили по общепринятой методике. Материал фиксировали в охлажденном 2,5% глютаральдегиде на фосфатном буфере с pH 7,3 с последующей дофиксацией 1% раствором осьмиевой кислоты на фосфатном бу |