(Кд) диаметров ядра, высоты и ширины клетки. Площадь ядра и клетки, цитоплазмо-ядерное отношение (ЦЯО) вычисляли по формулам: а 8я = л х 2 х 2 б ; SKJI = а~ х_ б-; SIGIБя ЦЯО = где: Бя площадь ядра; SKU площадь клетки; а длинный диаметр ядра или высота клетки; б короткий диаметр ядра или ширина клетки; ЦЯОцитоплазмо ядерное отношение Митотическую дегенеративные эпителиоцитов активность (митотический дегенерации клеток в индекс ИД) МИ) и изменения определяли (индекс из 1000 каемчатых (%о). миллипроцентах Одновременно вычисляли суммарное отношение МИ к ИД клеток. Цито и гистохимическими методами исследования выявляли ДНК и РНК метиловым зеленым пиронином по Браше, ДНК по ФельгенуРозунбеку (Пирс 3., 1962; Лили Р., 1969; Кононский А.И., 1976). В качестве контроля на ДНК служили препараты, обработанные кристалической ДНКазой, 5% хлорной кислотой (при 60 °С в течении 30 минут), а также препараты, не подвергавшиеся гидролизу в горячем (+60 °С) 1 М растворе соляной кислоты перед окраской их фуксин-сернистой кислотой. Контрольные срезы на РНК инкубировали в растворе панкреатической РНКазы (1 мг/мл при 37 С в течении 1 часа) и 1 М растворе соляной кислоты, подогретой до 37 °С в течении 3 часов (Пирс, 1962). Освобождение |
29 клетки. Площадь ядра и клетки, цитоплазмоядерное (ЦЯО) и саркоплазмо ядерное отношение (СЯО) вычисляли по формулам: а б 8я = л х — х — ; 2 2 Ssn Эя а б San = — х — ; 2 2 . 3 SM = а х б; ттяо — Бя сяо = SM-ЗЯ S* где: Бя площадь ядра; San площадь эпителиоцита; SM площадь миоцита; а длинный диаметр ядра или высота клетки; б короткий диаметр ядра или ширина клетки; ЦЯО цитоплазмоядерное отношение; СЯО саркоплазмоядерное отношение. Митотическую активность, митотический индекс (МИ) и дегенеративные изменения, индекс дегенерации (ИД) клеточных дифферонов эпителиальной ткани определяли из 1000 клеток в миллипроцентах (%о). Одновременно вычисляли суммарное отношение МИ к ИД клеток. Цифровые данные обрабатывались биометрическим методом исследования (Кононский А.И., 1976). Определяли среднюю арифметическую (М) и среднеквадратичное отклонение (5). В необходимых случаях вычисляли коэффициент корреляции (ч) по формулам: V (V-M)2 (Vx-Mx)x(Vy-My) М= — ; 8 = — ; ч= n п (п-1)х8хх8у Цитои гистохимическими методами исследования выявляли ДНК И РНК метиловым зеленым пиронином по Браше, ДНК по ФельгенуРозенбеку (Пирс 3., 1962; Лилли Р., 1969; Кононский А.Д., 1976). В качестве контроля на ДНК служили препараты, обработанные кристаллической ДНК 30 азой, 5% хлорной кислотой (при 60 С в течении 30 минут), а также препараты, не подвергавшиеся гидролизу в горячем 1 Мрастворе соляной кислоты • ;; . перед окраской их фуксин -сернистой кислотой. Контрольные срезы на РНК инкубировали в растворе панкреатической РНК-азы (1 мг/мл при 37 °С в течении 1 часа) и 1 М растворе соляной кислоты, подогретой до 37 °С в теченишЗчасов (Пирс 3;, 1962); Освобождение нуклеиновых кислот (НК) от белковых компонентов проводили в растворе трипсина (0,1 мг/мл при: 37 °С в течение 30 минут) и в 4 % растворе трихлоруксусной кислоты (ТХУ) (при 90 °С в течение 15 минут). Реакции на основные, кислые и суммарные белки проводили в водном .• ; V .' •, • • .• и сулемовом растворе бромфенолового синего (Елисеев В;Г., 1967), сулемаб'.'•"• ромфеноловым синим по Бонхегу (Пирс 3;, 1962). Контролем в реакциях на кислые и основные белки служили дезаминированные препараты,,а также препараты, обработанные раствором трипсина (Елисеев В Л?., 1967); Сульфгидрильные (-SH1)группы белков определяли по Бернетту-Зелигману, дисульфидные (-SS-) реакцией с надмуравьиной кислотой, альциановым си: }';•''••; .' ; • • _; / •• ;. ; -.:т ним по Адамсу и Слоперу. Совместное выявление этих групп проводили ре.',.-'.•• акцией; по Бернетту-Зелигману. Аминогруппы (-NH 2 ) белков выявляли по Ясума и Ичикава, по Бернету, карбоксильные (-СООН) группы поБернетуЗелигману (Пирс 3., 1962; Кононский А.Д., 1976). Суммарные, или общие, белки в тканях человека, животных и растений представлены различными видами протеинов и протеидов. Количество белковых веществ в клетках и тканях определяется многими факторами: их происхождением, спецификой функции, зрелостью организма, ткани и клеток, степенью физиологической нагрузки, условиемпитания, функциональным состоянием и др: Количество; гистохимических красителей; связанных с белками, пропорционально содержанию белковых веществ в тканях. Это типично для большинства методов используемых в цитои гистохимии. Гистохимия обладает небольшим количеством методов с помощью которых можно дифференцировать основные и кислые белки. Проявление белками основных .•.';;: ;.'/i'у-.;' .,;• ,;; ;• " \Д; . ';';.• ••• •• /; ' |