|
30 нуклеиновых кислот (НК) от белковых компонентов проводили в растворе трипсина (0,1 мг/мл при 37 °С в течение 30 минут) и в 4 % растворе трихлоруксусной кислоты (ТХУ) (при 90 °С в течение 15 минут). Реакции на основные, кислые и суммарные белки проводили в водном и сулемовом растворе бромфенолового синего (Елисеев В.Г., 1967), сулемабромфеноловым синим по Бонхегу (Пирс 3., 1962). Контролем в реакциях на кислые и основные белки служили дезаминированные препараты, а также препараты, обработанные раствором трипсина (Елисеев В.Г., 1967). Суммарные, или общие, белки в тканях человека, животных и растений представлены различными видами протеинов и протеидов. Количество белковых веществ содержащихся в клетках и тканях определяется многими факторами: их происхождением, спецификой функции, зрелостью организма, ткани и клеток, степенью физиологической нагрузки, местом животного в филологическом ряду, условием питания, функциональным состоянием и др. Количество гистохимических красителей, связанных с белками, пропорционально содержанию белковых веществ в клетках и тканях. Это типично для большинства методов используемых в цито и гистохимических исследованиях. Гистохимические методы исследования обладают небольшим количеством методов, с помощью которых можно дифферинцировать основные и кислые белки. Проявление белками основных свойств связано с преобладанием в их составе молекул содержащих аминогруппы над молекулами содержащими карбоксильные группы. Основные белки содержат высокий процент остатков диаминомонокарбоновых ациклических и некоторых циклических аминокислот. В молекулах кислых белков число карбоксильных групп преобладает над количеством аминных групп. Они построены главным образом из моноаминодикарбоновых аминокислот. Проявление кислых свойств у сложных белков, например фосфопротеидов, |
30 азой, 5% хлорной кислотой (при 60 С в течении 30 минут), а также препараты, не подвергавшиеся гидролизу в горячем 1 Мрастворе соляной кислоты • ;; . перед окраской их фуксин -сернистой кислотой. Контрольные срезы на РНК инкубировали в растворе панкреатической РНК-азы (1 мг/мл при 37 °С в течении 1 часа) и 1 М растворе соляной кислоты, подогретой до 37 °С в теченишЗчасов (Пирс 3;, 1962); Освобождение нуклеиновых кислот (НК) от белковых компонентов проводили в растворе трипсина (0,1 мг/мл при: 37 °С в течение 30 минут) и в 4 % растворе трихлоруксусной кислоты (ТХУ) (при 90 °С в течение 15 минут). Реакции на основные, кислые и суммарные белки проводили в водном .• ; V .' •, • • .• и сулемовом растворе бромфенолового синего (Елисеев В;Г., 1967), сулемаб'.'•"• ромфеноловым синим по Бонхегу (Пирс 3;, 1962). Контролем в реакциях на кислые и основные белки служили дезаминированные препараты,,а также препараты, обработанные раствором трипсина (Елисеев В Л?., 1967); Сульфгидрильные (-SH1)группы белков определяли по Бернетту-Зелигману, дисульфидные (-SS-) реакцией с надмуравьиной кислотой, альциановым си: }';•''••; .' ; • • _; / •• ;. ; -.:т ним по Адамсу и Слоперу. Совместное выявление этих групп проводили ре.',.-'.•• акцией; по Бернетту-Зелигману. Аминогруппы (-NH 2 ) белков выявляли по Ясума и Ичикава, по Бернету, карбоксильные (-СООН) группы поБернетуЗелигману (Пирс 3., 1962; Кононский А.Д., 1976). Суммарные, или общие, белки в тканях человека, животных и растений представлены различными видами протеинов и протеидов. Количество белковых веществ в клетках и тканях определяется многими факторами: их происхождением, спецификой функции, зрелостью организма, ткани и клеток, степенью физиологической нагрузки, условиемпитания, функциональным состоянием и др: Количество; гистохимических красителей; связанных с белками, пропорционально содержанию белковых веществ в тканях. Это типично для большинства методов используемых в цитои гистохимии. Гистохимия обладает небольшим количеством методов с помощью которых можно дифференцировать основные и кислые белки. Проявление белками основных .•.';;: ;.'/i'у-.;' .,;• ,;; ;• " \Д; . ';';.• ••• •• /; ' 31 свойств связано с преобладанием в их составе молекул аминогрупп над карбоксильными. Основные белки содержат высокий процент остатков диаминомонокарбоновых ациклических и некоторых циклических аминои иминокислот. В молекулах кислых белков число карбоксильных групп преобладает над аминными. Они построены главным образом из моноаминодикарбоновых аминокислот. Проявление кислых свойств сложных белков, например фосфопротеидов, связано с наличием в молекулах остатков минеральных кислот (Кононский, 1976). Для более объективного сопоставления полученных результатов при гистохимических исследованиях выводили средний гистохимический коэффициент (СГК) для различных клеточных дифферонов по формуле: сгк = 5а + 4б + 3в + 2 г + 1д + О , п где: а, б, в, г, д интенсивность окраски; цифры 5, 4, 3, 2, 1, 0 степень интенсивности окраски; п общее число клеток. Отсутствие окраски обозначали через 0. Степень интенсивности окрашивания определяли по 5-бальной системе (Астальди и Верга, 1957): следы окраски 1 балл, слабая окраска 2 балла, умеренная окраска 3 балла, хорошая 4 балла, интенсивная 5 баллов. Интенсивность окраски сопоставлялась с самой интенсивной окраской исследуемого этапа, и определяли визуально интенсивность в баллах. Среднеарифметическую (М), среднее квадратичное отклонение (а), ошибку среднего (±т) и критерий Стьюдента (t) определяли по формулам 2, 3, 4, 5. При расчетах ошибки выборочной разницы учитывали величину коэффициента линейной корреляции (г) (при условии ГФО, г=£+1, г=£-1) между сравниваемыми показателями (Плохинский Н.А., 1961). |