|
объединяя с первым фильтратом. Полученный экстракт выпаривали на водяной бане досуха. Сухие липидные экстракты использовались далее для определения продуктов перекисного окисления липидов диеновых конъюгатов, оснований Шиффа, малонового диальдегида в мембранах эритроцитов. 3. Определение содержания продуктов ПОЛ в мембранах эритроцитов Определение содержания ДК осуществляли по методу Стальной И.Д., Гаврилова В.Б., 1988 [108]: сухой липидный экстракт растворяли в 4 мл смеси гептан-изопропанол в соотношении 1:1. Раствор замеряли на СФ, длина волны 232 нм против смеси растворителей. Расчет проводился по формуле: Е х 90,91 ммоль/л в эритроцитах. Определение содержания МДА проводили по методу Стальной И.Д., Гаришвили Е.Г., 1977 [56]. К сухому липидному экстракту приливали 2 мл 17 % трихлоруксусной кислоты (ТХУ), 1 мл 0,8 % тиобарбитуровой кислоты (ТБК) и нагревали на кипящей водяной бане в течении 20 минут. После охлаждения содержимое пробирок центрифугировали. Замер проводился на СФ, длина волны 532 нм против контроля (2 мл ТХУ + 1 мл ТБК). Расчет проводился по формуле: Е х 256,4 ммоль/л для эритроцитов. Определение ШО проводилось по методу Bidlack в модификации Меерсона Ф.З. и др., 1984 [56]. Сухой липидный экстракт растворяли в 5 мл хлороформа и замеряли флюоресценцию при длине волны возбуждения 340390 нм, длине волны флюоресценции 420-490 нм. Результат выражали в условных единицах флюоресценции. 4. Исследование показателей антиоксидантной защиты Определение активности СОД проводилось по методу, описанному Чумаковым В.Н. и Осинской Л.Ф. в модификации Верболович В.П. с сотр., 1987 [125]. 0,1 мл эритроцитов гемолизировали 0,1 мл дистилированной воды, затем смешивали с 0,08 мл хлороформ-этаноловой смеси и 0,02 мл дистиллированной воды, встряхивали. Выдерживали в холодильнике 30 минут и центрифугировали при 1500 об/мин 10 минут. Отбирали 0,05 мл |
1. Отличная переносимость отсутствие побочных эффектов в течение всего периода исследования. 2. Хорошая переносимость преходящие побочные эффекты, не требующие отмены препарата. 3. Неудовлетворительная переносимость наличие побочных эффектов, требующих отмены препарата. 2.3 С пециальны е биохимические м етоды исследования. 1. Выделение эритроцитов Кровь для исследования забиралась из локтевых вей путем венепункции. Забор крови проводили натощак. В качестве аитикоагулягита применяли гепарин из расчета 300-500 M E на 1 мл крови. Кровь центрифугировали в течении 10 минут со скоростью 3000 об/мин.. затем убиралась сыворотка. Полученный материал использовали для дальнейшего исследования. 2. Приготовление липидных экстрактов из взвеси эритроцитов. В чистую пробирку помещали 0,2 мл эритроцитариой взвеси и добавляли 4 мл спирто-эфирной смеси в соотношении 3:1. Содержимое пробирки нагревалось на водяной бане до кипения, а затем отфильтровывалось в чистую пробирку, в первую пробирку снова добавляли 4 мл спирто-эфирной смеси и фильтровали, объединяя с первым фильтратом. Полученный экстракт выпаривали на водяной бане досуха. Сухие липидные экстракты использовались далее для определения продуктов псрекисного окисления липидов (ПОЛ) диеновых конъюгатов (ДК), оснований Ш иффа (Ш О), малонового диальдегида (МДА) в мембранах эритроцитов. 3. Определение содержания продуктов ПОЛ в мембранах эритроцитов. Диеновые конъюгаты (ДК) 57 Определение содержания ДК осуществляли по методу Стальной И.Д., Гаврилова В.Б., 1988 [98]: сухой липидный экстракт растворяли в 4 мл смеси гептан-изопропанол в соотношении 1:1. Раствор замеряли на СФ, длина волны 232 нм против смеси растворителей. Расчет проводился по формуле: Е х 90,91 ммоль/л в эритроцитах. Малоиовый диальдегид (МДА) Определение содержания МДА проводили по методу Стальной И.Д., Гаришвили Е.Г., 1977 [51]. К сухому липидному экстракту приливали 2 мл 17 % трихлоруксусной кислоты (ТХУ), 1 мл 0,8 % тиобарбитуровой кислоты (ТБК) и нагревали на кипящей водяной бане в течении 20 минут. После охлаждения содержимое пробирок центрифугировали. Замер проводился на СФ, длина волны 532 нм против контроля (2 мл ТХУ -I1 мл ТБК). Расчет проводился по формуле: Е х 256,4 ммоль/л для эритроцитов. Основания Шиффа (ШО) Определение UIO проводилось по методу Bidlack в модификации Мсерсона Ф.З. и др., 1984 [51J. Сухой липидный экстракт растворяли в 5 мл хлороформа и замеряли флюоресценцию при длине волны возбуждения 340390 нм, длине волны флюоресценции 420-490 им. Результат выражали в условных единицах флюоресценции. 4.Исследование показателей антиоксидантной защиты. Определение активности супероксиддисмутазы (СОД) Определение активности СОД проводилось но методу, описанному Чумаковым В.И. и Осииской Л.Ф. в модификации Верболович В.П. с сотр., 1987 [108]. ОД мл эритроцитов гемолизировали ОД мл дистилированной воды, затем смешивали с 0,08 мл хлороформ-этаноловой смеси и 0,02 мл дистиллированной воды, встряхивали. Выдерживали в холодильнике 30 минут и центрифугировали при 1500 об/мин 10 минут. Отбирали 0,05 мл надосадочного слоя и смешивали с 1,2 мл дистиллированной воды. Замер проводили на фиолетовом фильтре, длина волны 440 им. 58 |