следуют почки, сердце, легкие, селезенка, жир, головной мозг, низкие значения характерны для семенников, спермы, ЖКТ, мышц, соединительной ткани. Однако ГП есть во всех структурах соединительной ткани, особенно в матриксе. В большинстве тканей ГП преобладает или является практически единственным пероксидазным ферментом [20,140,147,148,214,248]. В изученных органах ГП преобладает в цитозоле и затем в матриксе митохондрий. На цитозоль печени приходится 66 75% общей активности, на митохондрии —23 —30 %. Фермент обнаружен в ядрах (около 10%), его мало фермента, обнаружены формы, связанные в печени и почках с плазматической мембраной [147,148,248]. Уровень ГП в тканях подвержен колебаниям при различных физиологических и патологических состояниях и зависит от пола, характера питания, сезона и прочих условий [54,166,204,219]. ГП выделена и очищена до гомогенности из 15 источников семи тканей семи видов млекопитающих и двух видов рыб. Удельная активность особенно высока в препаратах ГП из эритроцитов быка (550— 790 мкмоль/мин на 1 мг белка), а наиболее низка в препаратах из аорты свиньи и плазмы крови человека (20-28 мкмоль/мин на 1мг белка) [148]. ГП гомотетрамер, молекулярной массой 74 105 тыс. дальтон масса субъединиц 18 25 тыс. дальтон. [147,248]. Причины разброса непонятны. Однако если ГП из печени и плаценты человека иммунологически идентичны, то ферменты из эритроцитов и плазмы крови отличаются друг от друга. По мнению ряда авторов вероятно существование изоферментов ГП ввиду различий в удельной активности, массе, иммунологических свойствах и даже первичной структуре [54,140,242]. Субъединицы фермента состоят из 178 201 аминокислотных остатков [148]. Установлена полная первичная структура по |
колебаниям при различных физиологических и патологических состояниях и зависит от пола, характера питания, сезона и прочих условии [47,193,208,155].По большинству данных активность ГП наиболее высока в печени, надпочечниках, хрусталике, эритроцитах поджелудочной железе, затем следуют почки; средние значения характерны для сердца, легких, ЖКТ, островков поджелудочной железы, мышц. ГП есть во всех структурах соединительной ткани, особенно в матриксе. В большинстве тканей ГП преобладает или является практически единственным пероксидазным ферментом [124,125,237,17,201,120]. В клетке ГП локализуется преимущественно в цитозоле и матриксе митохондрий. На цитозоль клеток печени приходится 6 6 75% общей активности, на митохондрии ГП присутствует в ядрах ( 23 —30%. Другие органеллы изучены хуже, но 1 0 % ); ее очень мало в микросомах и (вплоть фермента, обнаружены формы, связанные в печени и почках с плазматической мембраной [124,125,237,51]. Выделяют четыре уровня регуляции ГП. Первый уровень —субстратная регуляция. Сопоставление концентрации субстратов с кинетическими константами ГП видетельствует, что фермент относительно насыщен GSH, но в большинстве тканей не насыщен промежуточное положение занимают ROOH (судя по плазме крови). Следовательно, реальная активность ГП должна быть намного меньше максимальной и лимитироваться количеством возникающей (возможно 7?ООТ/).Другим лимитирующим фактором может быть НАДФ-Н ввиду сопряжения работы ГП и глутатионредуктазы. Второй уровень аллостерическая регуляция. Аллостерическими ингибиторами служат КоА (концентрация полуингибирования равна 60 мкМ), а таюке нуклеотиды, особенно НАДФ+ и АТФ, которые могут действовать в физиологических условиях. Показана избирательная десентизация ГП к АТФ, что доказывает аллостерическую природу ингибирования АТФ. Третий уровень —регуляция Имеется достаточно много методик определения активности ГП в биологическом материале. Из них наибольшей популярностью пользуются спектрофотометрические, основанные на измерении скорости окисления НАДФН в сопряженной глутатионредуктазной реакции или по скорости окисления восстановленной формы глутатиона [99]. Меньше применяются колориметрические [185], флюориметрические [185], радиоиммунные [108] методы. Первые из них не отличаются высокой точностью и воспроизводимостью, а другие требуют достаточно сложной и дорогостоящей аппаратуры и реактивов. Для разделения изоэнзимов ГП используются электрофоретические и хроматографические методы [163]. ГП выделена и очищена до гомогенности из 15 источников семи тканей семи видов млекопитающих и двух видов рыб. Удельная активность особенно высока в препаратах ГП из эритроцитов быка (550—790 мкмоль/мин на I мг белка), а наиболее низка в препаратах из аорты свиньи и плазмы крови человека (20-28 мкмоль/мин на 1мг белка) [125]. Исследование гомогенных препаратов показало, что —ГП гомотетрамер с молекулярной массой 74 000— 105 000 а.е.м., масса субъединиц 18 000—25 000 а.е.м. [124,237]. В эритроцитах человека обнаружены две изоформы ГП, существенно отличающиеся по физико-химическим свойствам от ГП плазмы. При гель-фильтрации в плазме обнаруживаются 2 изоформы ГП (А и В), которые при проведении ионно-обменной хроматографии разделяются ещё на подфракции А1 и А2, В1 и В2. Изоэнзим А представляет собой тетрамер, а В — мономер. Изоформа А более термостабильна, чем изоэнзим В [47,120,226]. Глутатионпероксидазная активность — результат кооперации 2 изоэнзимов — селензависимой и селеннезависимой ГП. Селензависимые и селеннезависимые формы ГП существенно различаются по каталитическим свойствам: первые активно метаболизируют перекиси водорода, органические гидроперекиси, а вторые — обладают субстратной специфичностью к гидроперекисям, но не реагируют с перекисью водорода. |