Проверяемый текст
Наджиб, Ирина Викторовна; Клинико-диагностическое значение определения антител к глутатионпероксидазе у больных системной красной волчанкой при помощи магнитоуправляемых иммуносорбентов (Диссертация 2006)
[стр. 37]

Второй уровень —аллостерическая регуляция.
Аллостерическими ингибиторами служат КоА (концентрация полуингибирования равна 60 мкМ), а
также нуклеотиды, особенно НАДФ-Н, а затем НАДФ+ и АТФ, которые могут действовать в физиологических условиях.
Показана избирательная десентизация ГП к АТФ, что доказывает аллостерическую природу ингибирования АТФ.
Третий уровень —регуляция
гормонами краткосрочного действия и вторыми посредниками.
Стресс и экзогенные катехоламины активируют ГП во многих тканях и у многих видов млекопитающих по цепи:
(3-адренорецепторы аденилатциклаза цАМФ протеинкиназа А.
Четвертый уровень регуляция экспрессии Считается, что ГП — не
конститутивный, а индуцибельный фермент.
Особенно резко его экспрессию стимулирует селен, а недостаток последнего ингибирует ГП
[54,148].
Индуцируют ГП и женские половые гормоны.
Активность фермента в клетках печени и эритроцитах крысы выше у самок, чем у самцов.
Экспериментально показано, что кастрация самцов увеличивает активность ГП в печени, а самок — наоборот, снижает.
Значительно увеличивают активность ГП прогестерон и эстрадиол
[54,148].
ГП определяют двумя основными путями: 1 По уменьшению восстановленного глутатиона полярографически или химически; 2.
По уменьшению НАДФ-Н в сопряженном ферментном тесте с добавлением глутатионредуктазы и НАДФ-Н.
Имеется достаточно много методик определения активности ГП в биологическом материале.
Из них наибольшей популярностью пользуются спектрофотометрические, основанные на измерении скорости окисления НАДФН в сопряженной глутатионредуктазной реакции или по скорости окисления восстановленной формы глутатиона
[117].
Меньше [199],применяются колориметрические [199], флюориметрические радиоиммунные [124] методы.
Первые из них не отличаются высокой
[стр. 35]

колебаниям при различных физиологических и патологических состояниях и зависит от пола, характера питания, сезона и прочих условии [47,193,208,155].По большинству данных активность ГП наиболее высока в печени, надпочечниках, хрусталике, эритроцитах поджелудочной железе, затем следуют почки; средние значения характерны для сердца, легких, ЖКТ, островков поджелудочной железы, мышц.
ГП есть во всех структурах соединительной ткани, особенно в матриксе.
В большинстве тканей ГП преобладает или является практически единственным пероксидазным ферментом [124,125,237,17,201,120].
В клетке ГП локализуется преимущественно в цитозоле и матриксе митохондрий.
На цитозоль клеток печени приходится 6 6 75% общей активности, на митохондрии ГП присутствует в ядрах ( 23 —30%.
Другие органеллы изучены хуже, но 1 0 % ); ее очень мало в микросомах и (вплоть фермента, обнаружены формы, связанные в печени и почках с плазматической мембраной [124,125,237,51].
Выделяют четыре уровня регуляции ГП.
Первый уровень —субстратная регуляция.
Сопоставление концентрации субстратов с кинетическими константами ГП видетельствует, что фермент относительно насыщен GSH, но в большинстве тканей не насыщен промежуточное положение занимают ROOH (судя по плазме крови).
Следовательно, реальная активность ГП должна быть намного меньше максимальной и лимитироваться количеством возникающей (возможно 7?ООТ/).Другим лимитирующим фактором может быть НАДФ-Н ввиду сопряжения работы ГП и глутатионредуктазы.
Второй уровень аллостерическая регуляция.
Аллостерическими ингибиторами служат КоА (концентрация полуингибирования равна 60 мкМ), а
таюке нуклеотиды, особенно НАДФ+ и АТФ, которые могут действовать в физиологических условиях.
Показана избирательная десентизация ГП к АТФ, что доказывает аллостерическую природу ингибирования АТФ.
Третий уровень —регуляция


[стр.,36]

гормонами краткосрочного действия и вторыми посредниками.
Стресс и экзогенные катехоламины активируют ГП во многих тканях иу многих видов млекопитающих по цепи:
p-адренорецепторы —>аденилатциклаза —>цАМФ —> протеинкиназа А.
Четвертый уровень регуляция экспрессии.
Считается, что ГП не
констуитивный, а индуцибельный фермент.
Особенно резко его экспрессию стимулирует селен, а недостаток последнего ингибирует ГП
[125,47].
Индуцируют ГП и женские половые гормоны.
Активность фермента в клетках печени и эритроцитах крысы выше у самок, чем у самцов.
Экспериментально показано, что кастрация самцов увеличивает активность ГП в печени, а самок —наоборот, снижает.
Значительно увеличивают активность ГП прогестерон и эстрадиол
[125,47].
ГП открыта в 1957 г.
В 1968 г.
показано, что она восстанавливает органические гидроперекиси.
В 1973 г.
установлено, что ГП —селенопротеид [124,125].
В 1976 г.
обнаружена «неселеновая ГП», оказавшаяся глутатионтрансферазой.
К 1983-1984 гг.
выяснены полная первичная структура ГП и её третичная структура.
В 1986 г.
выделены и расшифрованы специфическая мРНК и ген ГП, установлен триплет, кодирующий селеноцистеин.
Регуляция ГП аллостерическими эффекторами обнаружена в 1970 г., индукция эстрогенами в 1969 г., активация катехоламинами и цАМФ в 1985 г.
[47].
ГП катализирует реакции: 2GSH + Н20 2-+ GSSG + 2Н20 2GSH + ROOH -* GSSG +ROH + Н20 В этих реакциях GSH (восстановленный глутатион) восстанавливает Н20 2 или органические гидроперекиси (ROOH) соответственно до воды или гидроксипроизводного и в результате переходит в окисленную дисульфидную форму GSSG [47].


[стр.,37]

Имеется достаточно много методик определения активности ГП в биологическом материале.
Из них наибольшей популярностью пользуются спектрофотометрические, основанные на измерении скорости окисления НАДФН в сопряженной глутатионредуктазной реакции или по скорости окисления восстановленной формы глутатиона
[99].
Меньше применяются колориметрические [185], флюориметрические [185], радиоиммунные [108] методы.
Первые из них не отличаются высокой точностью и воспроизводимостью, а другие требуют достаточно сложной и дорогостоящей аппаратуры и реактивов.
Для разделения изоэнзимов ГП используются электрофоретические и хроматографические методы [163].
ГП выделена и очищена до гомогенности из 15 источников семи тканей семи видов млекопитающих и двух видов рыб.
Удельная активность особенно высока в препаратах ГП из эритроцитов быка (550—790 мкмоль/мин на I мг белка), а наиболее низка в препаратах из аорты свиньи и плазмы крови человека (20-28 мкмоль/мин на 1мг белка) [125].
Исследование гомогенных препаратов показало, что —ГП гомотетрамер с молекулярной массой 74 000— 105 000 а.е.м., масса субъединиц 18 000—25 000 а.е.м.
[124,237].
В эритроцитах человека обнаружены две изоформы ГП, существенно отличающиеся по физико-химическим свойствам от ГП плазмы.
При гель-фильтрации в плазме обнаруживаются 2 изоформы ГП (А и В), которые при проведении ионно-обменной хроматографии разделяются ещё на подфракции А1 и А2, В1 и В2.
Изоэнзим А представляет собой тетрамер, а В — мономер.
Изоформа А более термостабильна, чем изоэнзим В [47,120,226].
Глутатионпероксидазная активность — результат кооперации 2 изоэнзимов — селензависимой и селеннезависимой ГП.
Селензависимые и селеннезависимые формы ГП существенно различаются по каталитическим свойствам: первые активно метаболизируют перекиси водорода, органические гидроперекиси, а вторые — обладают субстратной специфичностью к гидроперекисям, но не реагируют с перекисью водорода.

[Back]