|
ГЛАВА З.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 3.1.ПОЛУЧЕНИЕ ОБРАЗЦОВ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА Для проведения биохимических и иммунологических исследований образцов крови, ее забор осуществляли при пункции вены в утренние часы натощак. Кровь забиралась в объеме 3 —5 мл и помещалась в стеклянные пробирки. После формирования и ретракции сгустка в термостате при t = j /± i t в течение ои±о мин, стеклянной палочкой отделяли сгусток от стенок пробирки и подвергали центрифугированию при 3000 об/мин в течение 15 мин (лабораторная центрифуга ЦЛК-1). Затем отбирали сыворотку и помещали в аликвотах по 0,5 мл в пластиковые микроцетрифужные пробирки Eppendorf, которые хранили до момента анализа при t = -24°С. Повторного размораживания и замораживания образцов не допускалось. 3.2.ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 3.2.1. Характеристика антигена В качестве антигена использовали препарат глутатионпероксидазы производства НПО "РЕАХИМ" серия 186-68 с активностью 380 ЕД/мг и концентрацией белка 94,5 мг/мл. 3.2.2. Иммобилизация фермента Для получения иммобилизированной формы фермента использовали раствор с концентрацией 1,4 мг/мл по белку. Иммобилизацию проводили методом эмульсионной полимеризации в потоке газообразного азота с включением магнитного материала в структуру полиакриламидного геля (Гонтарь И.П. и соавт., 2002 г.) [21]. Полученные магнитосорбенты имели правильную сферическую форму с размером частиц от 10 до 100 мкм. |
ГЛАВА 3.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 3.1 .ПОЛУЧЕНИЕ ОБРАЗЦОВ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА При проведении биохимических и иммунологических исследований образцов крови ее забор осуществляли при пункции вены в утренние часы натощак. Кровь забиралась в объеме 3 —5 мл и помещалась в стеклянные пробирки. После формирования и ретракции сгустка в термостате при 37 ± 1°С в течение 60 ± 5 мин, стеклянной палочкой отделяли сгусток от стенок пробирки и центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 мин (лабораторная центрифуга ЦЛК-1), после чего отбирали сывороку и помещали в аликвотах по 0,5 мл в пластиковые микроцетрифужные пробирки типа Eppendorf, которые хранили до момента анализа при -24°С. Повторного размораживания и замораживания образцов не допускалось. 3.2.ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ4 3.2.1. ХАРАКТЕРИСТИКА АНТИГЕНА В качестве антигена использовался препарат глутатионпероксидазы производства НПО "РЕАХИМ" серия 186-68 с активностью 380 ЕД/мг и концентрацией белка 94,5 мг/мл. 3.2.2. ИММОБИЛИЗАЦИЯ ФЕРМЕНТА Для получения иммобилизированной формы фермента использовали раствор с концентрацией 1,4 мг/мл по белку. Иммобилизацию проводили методом эмульсионной полимеризации по И.П. Гонтарю с соавт. [18] в потоке газообразного азота с включением магнитного материала. Магнитосорбенты имели правильную сферическую форму с размером частиц от 10 до 100 мкм. |