концентрации 1 мг/мл в субстратном буфере (1М диэтаноламин, 0,5 мМ MgCl2, рН=9,8), который вносили по 100 мкл в каждую лунку, используя многоканальную пипетку. Развивалось окрашивание, интенсивность которого возрастала с увеличением количества антител. Результаты учитывали на многоканальном микропланшетном спектрофотометре при длине волны 405 нм. Полученные значения выражали в единицах оптической плотности (ЕОП). Окончательный результат определяли путем вычитания от среднего значения измеренных оптических плотностей исследуемого образца среднего значения фона, измеренного в лунках, содержащих аналогичный объем 0,01М фосфатного буферного раствора (рН=7,4) с 1% БСА. Наличие антител считалось положительным при превышении значений оптической плотности на 2 стандартных отклонения от средних значений контрольной группы. 3.3 ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ ГЛУТАТИОНПЕРОКСИДАЗЫ. Для определения активности ГП в плазме крови мы применяли метод Flohe L., Ganzler W.A, 1984 [149]. При расчете активности фермента использовали рекомендации В.С. Асатиани [7]. ГП катализирует реакцию инактивации перекиси водорода и гидроперекисей липидов (ROOH) в присутствии восстановленного глутатиона (GSH) с образованием воды и окисленного глутатиона (GSSG): ГП #22 + 2 GSH GSSG + 2#20 ROOH ROH По активности фермента представляется возможным судить о способности антирадикальной защиты на уровне образования гидроперекисей липидов, образующихся в реакциях ПОЛ. |
который вносился по каждую лунку с помощью многоканальной пипетки. Развивалось окрашивание, интенсивность которого возрастала с увеличением количества антител. Результаты учитывали на многоканальном микропланшетном спектрофотометре при длине волны 405 нм, полученные значения выражали в единицах оптической плотности, для получения которых от среднего значения измеренных оптических плотностей исследуемого образца вычитали среднее значение фона, измеренного в лунках, в которые вместо исследуемых образцов помещали аналогичный объем 0,01М фосфатного буферного раствора с рН=7,4 содержавшим 1% БСА. Наличие антител считалось положительным при превышении значений оптической плотности на 2 стандартных отклонения от средних значении контрольной группы. 3.3 ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ ГЛУТАТИОНПЕРОКСИДАЗЫ. Для определения активности ГП в плазме крови мы применяли метод Flohe L., Ganzler W.A, 1984 [126]. При расчете активности фермента использовали рекомендации В.С. Асатиани [4]. ГП катализирует реакцию инактивации перекиси водорода и гидроперекисей липидов (ROOH) в присутствии восстановленного глутатиона (GSH) с образованием воды и окисленного глутатиона (GSSG): ГП Н2О2 + 2 GSH GSSG + 2Н?0 ROOH ROH По активности фермента представляется возможным судить о способности антирадикальной защиты на уровне образования гидроперекисей липидов, образующихся в реакциях перекисного окисления липидов. |