|
Принцип определения ГП активности основан на способности окисления GSH в окисленную форму GSSG с помощью глутатионредуктазы (ГР). 1 мкМ ГР соответствует 12 мкМ GSH. Необходимыереагенты: ЭДТА, ГР, GSH, ГПТБ. Инкубационная смесь: 1 мМ ЭДТА;0,2 ЕД/мл ГР; 0,85 мМ GSH; 0,5 мМ ГПТБ; 500 мМ фосфатного буфера, pH 7,4; 0,2 мл плазмы крови. Конечный объем 3 мл. Температура инкубации 37°С, продолжительность инкубации 10 минут. Ход определения: В пробирку добавляется инкубационная смесь без материала плазмы на спектрофотометре СФ-26 при длине волны 340 нм в кварцевых кюветах Ь=1,0см ежеминутно в течение 3 минут ведется измерение экстинкции против контроля (3 мл 500 мМ фосфатного буфера pH 7,4). Расчет активности фермента проводится по формуле: АЕ/мин. •3 • 60 _______________ = АЕ/мин. ■144 6,22 • 0,2 где 3 объем инкубационной смеси (мл), 60 время реакции (мин), 6,22 коэффициент экстинкции ГР при 340 нм (см^/мкМ), 0,2 объем плазмы в опытной пробе (мл). Единица активности ГП это количество фермента, которое при t = + 37°С за 1 час окисляет 1 мкМ GSH и она выражается в ЕД/мл. 3.4. ОБЩЕКЛИНИЧЕСКИЕ И ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Иммуноглобулины классов A, G и М определяли методом радиальной иммунодиффузии в геле по Манчини [44], циркулирующие |
Принцип определения ГП активности основан на способности окисления GSH в окисленную форму GSSG с помощью глутатионредуктазы (ГР). 1 мкМ ГР соответствует 12 мкМ GSH. Необходимые реагенты: ЭДТА, ГР, GSH, ГПТБ. Инкубационная смесь: 1 мМ ЭДТА; 0,2 ЕД/мл ГР; 0,85 мМ GSH; 0,5 мМ ГПТБ; 500 мМ фосфатного буфера, pH 7,4; 0,2 мл плазмы крови. Конечный объем 3 мл. Температура инкубации 37°С, продолжительность инкубации 10 минут. Ход определения: в пробирку добавляется инкубационная смесь без биологического материала. После инкубации и добавления 0,2 мл плазмы на спектрофотометре СФ-26 при длине волны 340 нм в кварцевых кюветах 1,0 см ежеминутно в течение 3 минут ведется измерение экстинкции против контроля (3 мл 500 мМ фосфатного буфера pH 7,4). Расчет активности фермента проводится по формуле: АЕ/мин. -3-60 ----------------------= ДЕ/мин. • 144 6,22 • 0,2 где 3 объем инкубационной смеси (мл), 60 время реакции (мин), 6,22 коэффициент экстинкции ГР при 340 нм (см^/мкМ), 0,2 объем плазмы в опытной пробе (мл). Единица активности ГП это количество фермента, которое при t = + 37°С за 1час окисляет 1 мкМ GSH и она выражается в ЕД/мл. 3.4. ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ И ОБЩЕКЛИНИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Методом радиальной иммунодиффузии в геле по Манчини определяли иммуноглобулины классов A, G и М [34]. Циркулирующие иммунные комплексы определяли методом преципитации с полиэтиленгликолем 6000 по |