|
2.2.2 Цитохимический метод выявления гликогена Для выявления гликогена в лейкоцитах используется ШИК-реакция (реакция с Шифф-иодаткислотой). В результате взаимодействия реактива Шиффа (фуксинсернистой кислотой) с диальдегидом, образующимся при разрыве С-С связей в структурах, две смежные гликолевые группы в положении 1,2 (СНОНСНОН) под влиянием перйодной кислоты окисляются и выпадает продукт реакции красного или фиолетового цвета (А.Л. Шабадаш, 1947). Цитохимическое определение содержания гликогена в лейкоцитах проводилось по методике А.Л. Шабадаша (1947). Методика проведения реакции: 1. Мазки коови готовят по обычным ппавилам на очищенных и обезжиренных ? 4. 5. 6. предметных стеклах и высушивают на воздухе. Свежеприготовленные препараты фиксируют в абсолютном метиловом спирте в течение 5 минут. 3. Споласкивают в дистиллированной воде. Помещают на 10 минут в 1%-ный раствор перйодной кислоты. Промывают в дистиллированной воде. Помещают в реактив Шиффа на 30 минут при комнатной температуре в темноте. 7. Промывают мазки в трех сменах сернистой воды в течение 2-3 минут. 8. Промывают мазки в проточной воде в течение 10 минут. 9. Докрашивают ядра раствором гематоксилина Карацци. 10. Тщательно промывают мазки в проточной воде в течение 10-20 минут, высушивают и микроскопируют. Результат: В нейтрофильных палочкои сегментноядерных лейкоцитах обнаруживают большое количество ШИК-положительных веществ, которые выявляются как диффузное окрашивание или скопление небольшого размера темно-вишневых гранул в цитоплазме клеток. Ядра лейкоцитов синие или темнофиолетовые. 2.2.3.0пределение активности миелопероксидазы лейкоцитов Предложенные Для клинико-лабораторной практики методы цитохимического выявления миелопероксидазы основаны на применении |
противотуберкулезном диспансере при инфильтративном туберкулезе легких составила 144 койко-дня, при фиброзно-кавернозном туберкулезе -г 178 койко-дней, при диссеминированном туберкулезе —171 койко-день. У 18 больных заболевание ъ 4 выявлено впервые. У 12 больных продолжительность заболевания до настоящей госпитализации была превышала 5 лет 2 года, у 25 щительность * 39% ZZ.rir. . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 * w»**. •••• •j ;; М * 5 % * * — ...<»« « . 4-» Г Т ---*--41 1 1 1шШЛЛЛ I . г ;« * , I V * ч <а • \ -* • # г :V ♦ , * V й-Т 4* ' л ' а-. острь и очаговый R инфильтративный ■* □ фиброзно-кавернозный □ диссеминированный другие •От * 4 1 к-'.. ♦ « Ц * • * H i 'n s j l • • > ; Д f . ч • i l w> '* V / • / [ 4 * L & i£ , * • . ч . Г * Рисунок 2. Состав больных туберкулезом легких в*% \ ■ * > * ♦ % г < ■ * « ,4 fe 4 V . тЛ ' . ? & %'V. * ^ m I • А Щп » • и * V » • • I V .♦ * v v V V . . . . / * :■ r ' VV 4 • . £.* /S * * w . 4 •, ’ ^ ' • Г ж • . • « • • 4 Л i i . . . . ' w * T O * ^ , 1 *J , 4ta * » *» ‘ ' j t v ♦ • ' ' > . * 1 * : •_ • W~* " / \ \ . * / * ^ i L ' v , ’ 1 Y y V . V . Y * £ / 5 * ' ; < / • ! * • * • j T 1 2.2 Цитохимические методы исследования нейтрофильных лейкоцитов 1 Г ч » <*Ь• *Л • .* t ., , /П * ViC i * * * • #ff v ■ .. * vv^ ; . is * л ■■ л*1 • ' . . . ' V * ' ■ /. • * ’ r * * * x -4 : ■ ■ ■ ■ ♦A 0 V 3 * У 1 * *. * . i r ^ *' S ' ^ V f c ’ v V * : ’ 1 ^ : ; . • / • 4 T ■ -■ * ■ > ■ • w * ’ ' ■ 4Г-Л ' . -v?^ 2.2ЛОпределение активности миелопероксидазы лейкоцитов :;r: • • " > t 3 : ; , № V : • . : k v ^ /< ** * ; : ^ v Предложенные для клинико-лабораторной практики методы цитохимического ъ • 5-» выявления миелопероксидазы основаны на применении искусственных донорных • ■ * А. * * . ' ♦ субстратов, способных переходить в присутствии перекиси водорода и фермента в . . *“ f * ^ ■ * * 1 • х ■ * * 4 окрашенное нерастворимое соединение. Сущность заключается в превращении 4 ► % г > « Г »* эндогенной перекиси водорода в присутствии миелопероксидазы в воду с выделением 4 кислорода, который окисляет бензидин, переводя 1К ‘ ■л-. • ♦. . 1-? синего цвета. Определение миелопероксидазы 1 " » *> его в окрашенное ясоединение ' г -* :-* ;j-V . . в нейтрофильных лейкоцитах А ■ '* ^ I 4 7 периферической крови проводилось по методу Sato (1925). кислой фосфатазы с помощью реакции азосочетания по Goldberg и Barka (1962) в модификации В.И. Дудецкого (1970) основано на принципе одномоментного захвата. Первичным продуктом реакции является нафтол, который освобождается в результате расщепления а-нафтилфосфата, вводимого в инкубационную среду в качестве субстрата действия фермента. В инкубационной среде применяется основной раствор трисдиазония розанилина, который немедленно вступает в реакцию азосочетания с а-нафтолом, по мере того, как последний образуется в процессе ферментативной реакции. Методика проведенияреакции 1. Мазки крови готовят по обычным правилам на очищенных и обезжиренных предметных стеклах и высушивают на воздухе. 2. Фиксируют мазки крови в парах формалина в течение 1-? минут. 3. Для удаления паров фиксатора выдерживают мазки на воздухе в течение 30 минут. 4. Инкубируют мазки в течение 1,5 часов в инкубационной смеси, состоящей из равного количества инкубационных растворов 1 и 2. Инкубацию проводят в термостате при температуре +37С. 5. Промывают мазки в проточной воде в течение 15 минут. 6. Ополаскивают в дистиллированной воде. 7. Докрашивают ядра 0,25%-ным раствором «метиленового синего» в течение 30 секунд. 8. Споласкивают в проточной воде. 9. Мазки высушивают и микроскопируют. Результат: активность кислой фосфатазы выявляется в зрелых нейтрофильных гранулоцитах в виде пылевой зернистости и более крупных гранул краснокоричневого цвета разной интенсивности окраски. Приготовление инкубационного раствора 1: 90 мг а-нафтилфосфата растворяют в 26 мл дистиллированной воды и добавляют 10 мл основного раствора ацетатвероналового буфера Михаэлиса. Приготовление инкубационного раствора 2: в стакан с 1,6 мл 4%-ного раствора основного фуксина на 2 н соляной кислоте по каплям доливают 1,6 мл 4%-ного раствора нитрита натрия. Для удаления двуокиси азота добавляют 5-7 мг мочевины и 2.2.5 Цитохимический метод выявления гликогена Для выявления гликогена в лейкоцитах используется ШИК-реакция (реакция с Шифф-иодаткислотой). В результате взаимодействия реактива Шиффа (фуксинсернистой кислотой)_с диальдегидом, образуюшимся при^разрыве С-С связей в структурах, две смежные гликолевые группы в положении 1,2 (СНОН-СНОН) под влиянием перйодной кислоты окисляются и выпадает продукт реакции красного или фиолетового цвета (А.Л. Шабадаш, 1947). Цитохимическое определение содержания гликогена в лейкоцитах проводилось по методике А.Л. Шабадаша (1947). Методика проведения реакции 1. Мазки крови готовят по обычным правилам на очищенных и обезжиренных предметных стеклах и высушивают на воздухе. 2. Свежеприготовленные препараты фиксируют в абсолютном метиловом спирте в течение 5 минут. 3. Споласкивают в дистиллированной воде. 4. Помещают на 10 минут в 1%-ный раствор перйодной кислоты. 5. Промывают в дистиллированной воде и высушивают. 6. Помещают в реактив Шиффа на 30 минут при комнатной температуре в темноте. 7 Промывают мазки в трех сменах сернистой воды в течение 2-3 минут. 8. Промывают мазки в проточной воде в течение 10 минут. 9. Докрашивают ядра раствором гематоксилина Карацци. 10. Тщательно промывают мазки в проточной воде в течение 10-20 минут, высушивают и микроскопируют Результат: В нейтрофильных палочкои сегментоядерных лейкоцитах обнаруживают большое количество ШИК-положительных веществ, которые выявляются как диффузное окрашивание или скопление небольшого размера темновишневых гранул в цитоплазме клеток. Ядра лейкоцитов синие или темнофиолетовые. |