|
искусственных донорных субстратов, способных переходить в присутствии перекиси водорода и фермента в окрашенное нерастворимое соединение. Сущность заключается в превращении эндогенной перекиси водорода в присутствии миелопероксидазы в воду с выделением кислорода, который окисляет бензидин, переводя его в окрашенное соединение синего цвета. Определение миелопероксидазы в нейтрофильных лейкоцитах периферической крови проводилось по методу Sato (1925). Методика проведения реакции: 1. Мазки коови готовят по обычным поавилам на очишенных и обезжиоенных предметных стеклах и высушивают на воздухе. 2. Свежеприготовленные мазки фиксируют 4%-ным формалино-спиртовым раствором в течение 1 минуты. 3. Тщательно промывают дистиллированной водой и высушивают. 4. Помещают в 0,5%-ный раствор сульфата меди на 1минуту. 5. Промывают в дистиллированной воде. 6. Помещают в инкубационную среду (миелопероксидазный реактив) на 2 минуты. 7. Промывают в дистиллированной воде. 8. Ядра докрашивают 0,02%-ным водным раствором сафранина в течение 1-2 минут. 9. Мазки споласкивают в проточной воде, высушивают и микроскопируют. Результат: миелопероксидаза содержится преимущественно в цитоплазме гранулоцитов и выявляется в виде синих гранул. Приготовление инкубационной среды 0,2 г бензидина растирают в ступке с небольшим количеством воды, добавляют 200 мл дистиллированной воды при комнатной температуре. Фильтруют и прибавляют 4 капли (0,02 мл) 3%-ного раствора перекиси водорода. 2.2.4 Определение активности щелочной фосфатазы в гранулоцитах Определение активности щелочной фосфатазы, так же, как и кислой, основаны на применении а-нафтилфосфата или его производных и различных диазотатов. На этом принципе основан вариант метода азосочетания, предложенный М.Г. Шубичем (1965). Реакция азосочетания для обнаружения |
противотуберкулезном диспансере при инфильтративном туберкулезе легких составила 144 койко-дня, при фиброзно-кавернозном туберкулезе -г 178 койко-дней, при диссеминированном туберкулезе —171 койко-день. У 18 больных заболевание ъ 4 выявлено впервые. У 12 больных продолжительность заболевания до настоящей госпитализации была превышала 5 лет 2 года, у 25 щительность * 39% ZZ.rir. . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 * w»**. •••• •j ;; М * 5 % * * — ...<»« « . 4-» Г Т ---*--41 1 1 1шШЛЛЛ I . г ;« * , I V * ч <а • \ -* • # г :V ♦ , * V й-Т 4* ' л ' а-. острь и очаговый R инфильтративный ■* □ фиброзно-кавернозный □ диссеминированный другие •От * 4 1 к-'.. ♦ « Ц * • * H i 'n s j l • • > ; Д f . ч • i l w> '* V / • / [ 4 * L & i£ , * • . ч . Г * Рисунок 2. Состав больных туберкулезом легких в*% \ ■ * > * ♦ % г < ■ * « ,4 fe 4 V . тЛ ' . ? & %'V. * ^ m I • А Щп » • и * V » • • I V .♦ * v v V V . . . . / * :■ r ' VV 4 • . £.* /S * * w . 4 •, ’ ^ ' • Г ж • . • « • • 4 Л i i . . . . ' w * T O * ^ , 1 *J , 4ta * » *» ‘ ' j t v ♦ • ' ' > . * 1 * : •_ • W~* " / \ \ . * / * ^ i L ' v , ’ 1 Y y V . V . Y * £ / 5 * ' ; < / • ! * • * • j T 1 2.2 Цитохимические методы исследования нейтрофильных лейкоцитов 1 Г ч » <*Ь• *Л • .* t ., , /П * ViC i * * * • #ff v ■ .. * vv^ ; . is * л ■■ л*1 • ' . . . ' V * ' ■ /. • * ’ r * * * x -4 : ■ ■ ■ ■ ♦A 0 V 3 * У 1 * *. * . i r ^ *' S ' ^ V f c ’ v V * : ’ 1 ^ : ; . • / • 4 T ■ -■ * ■ > ■ • w * ’ ' ■ 4Г-Л ' . -v?^ 2.2ЛОпределение активности миелопероксидазы лейкоцитов :;r: • • " > t 3 : ; , № V : • . : k v ^ /< ** * ; : ^ v Предложенные для клинико-лабораторной практики методы цитохимического ъ • 5-» выявления миелопероксидазы основаны на применении искусственных донорных • ■ * А. * * . ' ♦ субстратов, способных переходить в присутствии перекиси водорода и фермента в . . *“ f * ^ ■ * * 1 • х ■ * * 4 окрашенное нерастворимое соединение. Сущность заключается в превращении 4 ► % г > « Г »* эндогенной перекиси водорода в присутствии миелопероксидазы в воду с выделением 4 кислорода, который окисляет бензидин, переводя 1К ‘ ■л-. • ♦. . 1-? синего цвета. Определение миелопероксидазы 1 " » *> его в окрашенное ясоединение ' г -* :-* ;j-V . . в нейтрофильных лейкоцитах А ■ '* ^ I 4 7 периферической крови проводилось по методу Sato (1925). Методика проведенияреакции. 1. Мазки крови готовят по обычным правилам на очищенных и обезжиренных предметных стеклах и высушивают на воздухе. 2. свежеприготовленные мазки фиксируют 4%-ным формалино-спиртовым раствором-в течение 1-минуты_ _ _______________________ 3. тщательно промывают дистиллированной водой и высушивают. 4. Помещают в 0,5%-ный раствор сульфата меди на 1минуту. 5. Промывают в дистиллированной воде. 6. Помещают в инкубационную среду (миелопероксидазный реактив) на 2 минуты. 7. Промывают в дистиллированной воде. 8. Ядра докрашивают 0,02%-ным водным раствором сафранина в течение 1-2 минут. 9. Мазки споласкивают в проточной воде, высушивают и микроскопируют. Результат: миелопероксидаза содержится преимущественно гранулоцитов и выявляется в виде синих гранул. в цитоплазме Приготовление инкубационной среды 0,2 г бензидина растирают в ступке с небольшим количеством воды, добавляют 200 мл дистилированной воды при комнатной температуре. Фильтруют и прибавляют 4 капли (0,02 мл) 3%-ного раствора перекиси водорода. * 2.2.2 Определение активности щелочной фосфатазы в гранулоцитах Определение активности щелочной фосфатазы, так же, как и кислой, основаны на применении а-нафтилфосфата или его производных и различных диазотатов. На этом принципе основан вариант метода азосочетания, предложенный М.Г. Шубичем (1965).Реакция азосочетания для обнаружения щелочной фосфатазы основана на принципе одновременного захвата (Э.Пирс, 1962). Первичным продуктом реакции является нафтол, который освобождается в результате расщепления щелочной * фосфатазой а-нафтилфосфата, вводимого в инкубационную смесь в качестве субстрата действия фермента. Диазоний 4-амино-4-метоксидина (диазоль синий 0) немедленно вступает в реакцию азосочетания с а-нафтолом по мере того, как последний образуется в процессе ферментативной реакции азосочетания, выявляется встряхивают стакан до прекращения отхождения пузырьков газа. Затем инкубационные растворы сливают вместе. pH среды доводят с помощью 1 н едкого Ч натрия до 5,5. 2.2.4 Цитохимичесий метод выявления катионого белка Дляцитохимического выявления катионного белка влейкоцитах используют диахромовые анионные красители. В основе этих методов лежит избирательное реагирование катионного белка красителями прочным зеленым или бромфеноловым синим при pH 8,1-8,2. При этом катионный белок является единственным биополимером, взаимодействующим с анионовым красителем с образованием ионных связей (Б.С. Нагоев, 1982). Оригинальный метод выявления катионного белка нейтрофильных лейкоцитов периферической крови экспериментальных животных и человека с использованием доступного отечественного препарата-красителя бромфенолового синего при pH 8,2 был предложен М.Г. Шубичем (1974). Для цитохимического исследования содержания катионного белка в использовали методику М.Г. Шубича (1983). Методика проведения реакции. 1. Мазки коови готовят п предметных стеклах и высушивают на воздухе. 2. Свежеприготовленные мазки фиксируют 4%-ным формалино-спиртовым раствором в течение 1 минуты 3. Тщательно промывают дистиллированной водой и высушивают. 4. Окрашивают в 0,1%-ном растворе бромфенолового синего в 0,05 М боратном буфере (pH 8,2) в течение 1-2 минут. 5. Мазки промывают в трех сменах 0,05 М боратного буфера по 1-2 минуте в каждой смене. 6. Высушиваюти докрашивают ядра в 1%-ном растворе сафранина 30-60 секунд 7. Мазки тщательно промывают проточной водопроводной водой. 8. Высушивают и микроскопируют под иммерсионным объективом. Результат: гранулы нейтрофильных лейкоцитов интенсивно окрашиваются в сини] цвет, а ядро и цитоплазма не окрашиваются. |