|
Иммунологические исследования включали определение трех классов иммуноглобулинов, Т-лимфоцитов и их субпопуляций, В-лимфоцитов и определение фагоцитоза. Оценку Т-системы иммунитета проводили по содержанию Т-лимфоцитов в периферической крови с помощью реакции спонтанного розеткообразования с 0,05% суспензией эритроцитов барана (БРОК). Определение Т-хелперов и Т-супрессоров проводили в тесте с использованием теофиллина. Содержание В-лимфоцитов в периферической крови оценивали в реакции ЕАС-РОК с 0,05% суспензией мышиных эритроцитов. Данные исследования проводились по методике Меньшикова (1978). Основным в оценке гуморального иммунитета было определение содержания иммуноглобулинов сыворотки крови классов А, М, G методом радиальной иммунодиффузии в агаре по Mancini et. al. (1965) с использованием отечественных моноспецифических сывороток, выпускаемых Московским НИИ вакцин и сывороток им. И. Н. Мечникова. Уровень циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) определяли в тесте преципитации с полиэтилен гликолем (ПЭГ) по В. Гашковой и соавт. (1978). Для определения фагоцитарной активности нейтрофилов использовали методику М. И. Кузина (1984). Также для исследования фагоцитарной активности нейтрофилов (ФАН) была использована оригинальная методика, разработанная коллективом исследователей Пермской медицинской академии под руководством В.Н. Каплина (1998). В качестве объектов фагоцитоза использовали эритроциты из эритроцитарного сухого антигенного диагностикума из шигелл Sonne Санкт Петербургского НИИВС. Нами разработана методика использования жидкого эритроцитарного диагностикума (удостоверение на рацпредложение №9.01 выдано БРИЗом ИГМА 03.02.2001 г.). Диагностикум разводили до концентрации 50 60 млн/мл. Взятую из пальца кровь стабилизировали гепарином и смешивали с равным объемом взвеси эритроцитарного диагностикума, смесь инкубировали 20 мин в термостате при 37°С. 52 |
Полипептиды средней молекулярной массы (ПСММ) определяли методом прямой спектрофотометрии на спектрофотометре СФ-46 (Россия) при длинах волн равными 254 нм и 280 нм по Н. И. Габриэлян (1985) [50, 51,265]. Иммунологические исследования включали определение трех классов иммуноглобулинов, Т-лимфоцитов и их субпопуляций, В-лимфоцитов и определение фагоцитоза. Оценку Т системы иммунитета проводили по содержанию Т-лимфоцитов в периферической крови с помощью реакции спонтанного розсткообразования с 0,05% суспензией эритроцитов барана (ЕРОК). Определение Т-хелпсров и Т-супрессоров проводили в тесте с использованием теофиллина. Содержание В-лимфоцитов в периферической крови оценивали в реакции ЕАС-РОК с 0,05% суспензией мышиных эритроцитов. Данные исследования проводились по методике Меньшикова (1987). Основным в оценке гуморального иммунитета было определение содержания иммуноглобулинов сыворотки крови классов А, М, G методом радиальной иммунодиффузии в агаре по Mancini et. Al. (1965) с использованием отечественных моноспецифических сывороток, выпускаемых Московским НИИ вакцин и сывороток им. И. Н. Мечникова. Уровень циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) определяли в тесте преципитации с полиэтиленгликолем (ПЭГ) по В. Гашковой и соавт. (1978). Для определения фагоцитарной активности нейтрофилов использовали методику М. И. Кузина (1984). Также для исследования фагоцитарной активности нейтрофилов (ФАИ) была использована оригинальная методика, разработанная коллективом исследователей Пермской медицинской академии под руководством В. Н. Каплина (1998). В качестве объектов фагоцитоза использовали эритроциты из эритроцитарного сухого антигенного диагностикума из шигелл Sonne Санкт-Петербургского НИИВС. Нами разработана методика использования жидкого эритроцитарного диагностикума (Удостоверение на 67 рацпредложение № 9. 01 выдано БРИЗом ИГМА 03. 02. 2001 г.). Диагностикум разводили до концентрации 50-60 млн./мл. Взятую из пальца кровь стабилизировали гепарином и смешивали с равным объемом взвеси эритроцитарного диагностикума, смесь инкубировали 20 мин в термостате при 37°С. Р1зготовляли маленькие мазки шириной 3-4 мм и длиной 18-20 мм. Мазки фиксировали и окрашивали по Ромаиовскому-Гимзе. Определяли поглотительную активность 100 нейтрофилов. Для оценки ФАН использовали следующие критерии: процент фагоцитирующих клеток, среднее число поглощенных объектов на один нейтрофил (фагоцитарное числоФЧ) и индекс активности фагоцитов (ИАФ), который рассчитывали путем деления суммы объектов, поглощенных активными фагоцитами (с величиной поглощения три и более объектов) на сумму объектов, поглощенных малоактивными фагоцитами (с величиной поглощения 1-2 объекта). Затем величину ИАФ у пациента делили на стандартную величину ИАФ с такой же величиной ФЧ, что и у пациента, и получали ИАФ в стандартном выражении ИАФСПШД., которое у здоровых людей составляет 0,71,4. Качество жизни больных, при оценке отдаленных результатов, определялось по вопроснику SF-36 no J. Ware [372] Статистическая обработка материала проведена на базе IBM PC, компьютерной программы Excel 2000. Для описания нормально распределенных переменных мы использовали следующие показатели: число наблюдений (п) , среднее значение признака (М), стандартную ошибку среднего (ш). Достоверность различий определяли по критерию Стыодента (t) с поправкой Бонферрони для независимых групп. Различия считали достоверными при р<0,05, р<0,01, р<0,001[80]. 68 |