|
Уровень иммунореактивного инсулина и С-пептида в венозной крови определяли после 12-часового голодания (базальные величины) и через 2 часа после приема внутрь 75 г глюкозы в растворе (постнагрузочные или постпрандиальные величины) в процессе проведения стандартного теста толерантности к глюкозе. Иммунореактивный инсулин (ИРИ) определяли радиоиммунным методом с помощью стандартных наборов реактивов («РИО-ИНС-ПГ-125» Белоруссия). Концентрацию С-пептида (Сп) также определяли радиоиммунологическим методом с набором реактивов RiamatByk-Mallinckrodt (Германия-Голландия) [1,31, 242]. После центрифугирования при скорости 1000 об/мин в течение 15 минут сыворотку хранили при температуре -20°С не более 60 дней до постановки тестов с исследуемыми образцами. ИРИ «конкуренции» между меченным 125J инсулином и инсулином калибровочной или исследуемой пробы за связывание со специфическими антителами. Фракции свободного и связанного с антителами инсулина разделяли с помощью полиэтиленгликоля. Концентрацию ИРИ в исследуемых пробах сыворотки крови определяли по калибровочной кривой зависимости активности связанного 25J инсулина от концентрации инсулина. Результаты выражали в мкед/мл (для перевода объемно-весовой концентрации инсулина в молярную использовали соотношение мкед/мл х 6,4 = пмоль/л). Методика определения С-пептида аналогична методике определения ИРИ. Результаты выражали в нг/мл (нг/мл х 0,333 = нмоль/мл). Для выявления ИР вычисляли два индекса: отношение глюкозы к ИРИ и отношение Сп/ИРИ натощак и через 2 часа после нагрузки 75 г глюкозы. Критерием наличия ИР считали снижение отношения глюкозы/ИРИ ниже 0,33 и Сп/ИРИ ниже 0,23. Для расчета второго индекса переводили концентрацию в нг/мл. Считается, что первое соотношение характеризует уровень соответствия секреции инсулина гликемии в данный конкретный момент, а второе —отражает величину клиренса инсулина печенью. |
экспертов ВОЗ (1999). Уровень глюкозы натощак более 6,1 ммоль/л, а через 2 часа в пределах от 7,8 до 11,1 ммоль/л, считали как нарушение толерантности к глюкозе [2, 11, 168]. Уровень иммуиореактивного инсулина и С-пептида в венозной крови определяли после 12-часового голодания (базальные величины) и через 2 часа после приема внутрь 75 г глюкозы в растворе (постнагрузочные или постпрандиальные величины) в процессе проведения стандартного теста толерантности к глюкозе. Иммунореактивный инсулин (ИРИ) определяли радиоиммунным методом с помощью стандартных наборов реактивов («РИО-ИНС-ГТГ-125» Белоруссия). Концентрацию С-пептида (Сп) также определяли радиоиммунологическим методом с набором реактивов Ria-mat BykMallinckrodt (Германия-Голландия) [2,242]. После центрифугирования при скорости 1000 об/мин в течение 15 минут сыворотку хранили при температуре ~20°С не более 60 дней до постановки тестов с исследуемыми образцами. В основе метода определения ИРИ в сыворотке крови лежит принцип «конкуренции» между меченным l25J инсулином и инсулином калибровочной или исследуемой пробы за связывание со специфическими антителами. Фракции свободного и связанного с антителами инсулина разделяли с помощью полиэтиленгликоля. Концентрацию ИРИ в исследуемых пробах сыворотки крови определяли по калибровочной кривой зависимости 19S активности связанного J инсулина от концентрации инсулина. Результаты выражали в мкед/мл (для перевода объемно-весовой концентрации инсулина в молярную использовали соотношение мкед/мл х 6,4 = пмоль/л). Методика определения С-пептида аналогична методике определения ИРИ. Результаты выражали в нг/мл (нг/мл х 0,333 = нмоль/мл). Для выявления ИР вычисляли два индекса: отношение глюкозы к ИРИ и отношение Сп/ИРИ натощак и через 2 часа после нагрузки 75 г глюкозы. Критерием наличия ИР считали снижение отношения глюкозы/ИРИ ниже 0,33 и Сп/ИРИ ниже 0,23. Для расчета второго индекса переводили концентрацию в нг/мл. Считается, что первое соотношение характеризует уровень соответствия секреции инсулина гликемии в данный конкретный момент, а второе отражает величину клиренса инсулина печенью. Определение липидного спектра плазмы крови. Определение концентрации общего холестерина, триглицеридов и ХС ЛПВП сыворотки венозной крови, взятой утром после 12-часового голодания, проводили энзиматическим методом на химической анализатороной системе FP-900 фирмы «Labsistems» (Финляндия). Уровень ХС ЛПНГ1 рассчитывали по формуле W.Friedewald и соавт. (1972) в модификации Dahlen G.H.h соавт. (1986): ХС ЛПНП=ОХС-(ХС ЛПВП + ТГ/2,2). Коэффициент атерогенности рассчитывали общепринятым способом по Климову А.Н. (1995). Методика определения микроальбуминурии. Для количественного определения альбумина в моче был использован иммуноферментный метод, основанный на принципе конкурентного твердофазного ИФА-ELISA, в ходе которого проходят конкурентная реакция и ферментная цветная реакция [142, 233]. Оптическая плотность определяется в биохроматическом режиме при 450 нм с фильтром сравнения 600-690 нм. Расчет производится с использованием 4-параметрической регрессии с линейно-логарифмическими координатами для оптической плотности и концентрации. Уровень эндотелина-1 (ЭТ-1) определяли иммуноферментным методом на тест-системах фирмы «Biomedica» (Австрия), разработанных для анализа ЭТ-1 в биологической жидкости. Метод основан на способности эндотелина связываться с детектирующими антителами, образуя «сэндвичевый» комплекс. Комплекс пероксидазы с антителами обнаруживает связанные антитела. После удаления несвязавшегося конъюгата вносится ферментный субстрат ТМБ. Интенсивность окраски прямо пропорциональна содержанию эндотелина-1 [15,219]. Определение фактора Виллебранда. Определение уровня фактора Виллебранда в плазме крови проводилось на лазерном анализаторе агрегации |