|
26 пользовали метод Маллори, который выявляет коллагеновые и ретикулярные волокона, хрящ, кости. Окраску срезов проводили готовыми стандартными наборами красителей производства компании Биовитрум. В этом методе применяются карболфуксин для окрашивания ядер, оранж G для цитоплазмы и анилиновый синий для избирательного окрашивания коллагена. Главную роль играет фосфомолибденовая кислота, действие которой связано с тканевыми структурами (коллагеном, клеточной мембраной) и анилином голубым (амфотерный краситель). Оранж G не имеет сродства с фосфомолибденовой кислотой и применяется для окраски всех оставшихся структур, не связанных с фосфомолибденовой кислотой. Коллагеновые волокна в результате окраски принимали темносиний цвет; хрящи, кости были от бледно-голубого до темносинего; ядра, миофибриллы, нейроглия, аксоны бледно-розовый; эритроциты, миелин насыщенно-желтый. 2.3. Методы исследования, использованные для изучения развития нервных узлов крысы Для выявления нейробластов и нейронов проводили импрегнацию нитратом серебра по методу Бильшовского-Грос в модификации Б.И. Лаврентьева. Материал фиксировали в 12% формалине более 7 дней, со сменой фиксирующего раствора на 2-ые сутки. На замораживающем микротоме изготовлялись срезы толщиной 20-40 мкм (перед резкой материал отмывали в дистиллированной воде). Из дистиллированной воды срезы переносили в 20% раствор азотнокислого серебра на 10-30 мин, а спустя указанное время, срезы проводились через 3-4 порции 20% кислого формалина (до |
2.2. Методы исследования, использованные для развития соединительнотканной стромы изучения околоушной слюнной железы Для стандартного окрашивания соединительной ткани: выявления коллагеновых волокон, ретикулярных волокон, хряща, кости, был использован метод Маллори. В этом методе применяются 3 различных красителя: карболфуксин для окрашивания ядер, оранж G для цитоплазмы и анилиновый синий для избирательного окрашивания коллагена. Центральную роль играет фосфомолибденовая кислота, действие которой связано с тканевыми структурами (коллагеном, клеточной мембраной) и анилином голубым (амфотерный краситель). Оранж G, который является вторым компонентом полихромного раствора по Маллори, не имеет сродства с фосфомолибденовой кислотой и таким образом применяется для окраски всех оставшихся структур, не связанных с фосфомолибденовой кислотой. В состав набора входят следующие реактивы A. Карболфуксин по Цилю, 30 мл B. Кислотный буфер, 30 мл C. Раствор фосфомолибденовой кислоты, 30 мл О.Полихромный раствор по Маллори, 30 мл Окрашивание производили в следующем порядке 1. Парафиновые срезы освобождали от парафина, используя для этого ксилол, проводили по спиртам нисходящей крепости доводя срезы до воды и помещали срезы в дистиллированную воду. 39 2. Наносили на срезы 10 капель реагента А и оставляли на 10 мин. 3. Промывали срезы в дистиллированной воде, наносили на срез 10 капель реактива В и оставляли на 10 сек. 4. Быстро промывали в воде и наносили на срезы 10 капель реагента С, оставляли на 5 мин. 5. Не промывая, наносили 10 капель реактива D, оставляли на 1 мин. 6. Промывали Дегидрировали в срезы спиртах в дистиллированной возрастающей воде. концентрации, абсолютном этаноле, просветляли в ксилоле и заключали под покровное стекло. В результате окраски коллагеновые волокна принимали темно-синий цвет; хрящи, кости, от бледно-голубого до темносинего; ядра, миофибриллы, нейроглия, аксоны бледно-розовый; эритроциты, миелин насыщенно-желтый. 2.3. Методы исследования, использованные для изучения развития тройничного и ушного узлов, а также переднего узла симпатического ствола крысы В этой части работы для выявления нейробластов и нейронов проводили импрегнацию нитратом серебра Билыновского-Грос в модификации Б.И. Лаврентьева. Свежевзятый материал фиксировали в 12% формалине более 7 дней. На 2-е сутки фиксации проводили смену фиксирующего раствора. Перед резкой материал отмывали в дистиллированной воде. Срезы толщиной 20-40 мкм готовились на заморапо методу живающем микротоме. Из дистиллированной воды срезы стек 40 |