|
27 исчезновения мути). Из последней порции формалина срезы вынимали стеклянной палочкой, обсушивали фильтровальной бумагой и переносили в аммиачное серебро, после которого их промывали в дистиллированной воде до исчезновения запаха аммиака. Далее срезы помещали в раствор хлорного золота до появления серого цвета, после чего переносили в 5% раствор гипосульфита. Отмывали в нескольких порциях дистилли рованной воды, обезвоживали в спиртах и заключали в бальзам. Нами так же был применен метод окраски крезил-виолетом по Фоксу для характеристики субстанции Ниссля, которая надежным показателем степени созревания нейронов. Материал фиксировали в 96% спирте и заливали в парафин. Срезы толщиной 7-10 мкм освобождали от парафина и по спиртам нисходящей крепости доводили до дистиллированной воды. Помещали в крезил-виолет по Фоксу на 45 мин, дифференцировали в 96% спирте, обезвоживали, просветляли и заключали под покровное стекло. Р. Т. А. Н. Фосфовольфрамовый гематоксилин использовали для окраски нейроглии. Окраску инструкцией компании Биовитрум. В результате астроциты, нейроглия, миелиновые волокна окрашивались в темно-голубой цвет. Коллаген, костный матрикс, хрящ принимали различные оттенки кирпично-красного цвета. проводили руководствуясь 2.4. Методы исследования, использованные для изучения ферментативной активности клеток поднижнечелюстной слюнной железы Выявление ферментов в клетках околоушной слюнной железы проводили у эмбрионов 18 — 21 -ого дней, у новорожденных крысят на 1 и 2 сутки после рождения. |
лянной палочкой переносили в 20% раствор азотнокислого серебра на 10-30 мин. Спустя указанное время, срезы проводились через 3-4 порции 20% кислого формалина (до исчезновения мути). Из последней порции формалина срезы вынимали стеклянной палочкой, обсушивали фильтровальной бумагой и переносили в аммиачное серебро. После этого срезы промывали в дистиллированной воде до исчезновения запаха аммиака. Затем срезы помещали в раствор хлорного золота до появления серого цвета, после чего переносили в 5% раствор гипосульфита. В дальнейшем срезы промывали в нескольких порциях дистиллированной воды, обезвоживали в спиртах и заключали в бальзам. Надежным показателем степени созревания нейронов является характеристика субстанции Ниссля, и с этой целью нами применен метод окраски крезил-виолетом по Фоксу. Материал фиксировали в 96% спирте с дальнейшей заливкой в парафин. Срезы толщиной 7-10 мкм освобождали от парафина, по спиртам нисходящей крепости доводили до дистиллированной воды. Помещали в крезил-виолет по Фоксу на 45 мин, дифференцировали в 96% спирте, обезвоживали, просветляли и заключали под покровное стекло. Для окраски нейроглии применяли Р. Т. А. Н. Фосфовольфрамовый гематоксилин. Несмотря на то, что в настоящее время этот метод используется в основном с целью дифференциации гладкой и поперечно-полосатой мышечной ткани, изначально он был предложен для окраски нейроглии. Фосфовольфрамовая кислота, являясь транспортером красителя, образует как химические, так и физические связи с тканевыми элементами, обеспечивая 41 окрашивание данных элементов. В состав набора входят следующие реактивы: A. Раствор перманганата калия, 18 мл B. Кислотный буфер, 18 мл C. Раствор щавелевой кислоты, 30 мл D. Р.Т.А.Н. по Маллори, 80 мл Окраску проводили в следующем порядке. 1. Депарафинированные срезы помещали в дистиллированную воду. 2. Наносили на срез 5 капель реактива А к нему добавляли 5 капель реактива В, оставляли на 5 мин. 3. Промывали срезы в дистиллированной воде. 4. Наносили на срез 10 капель реактива С, оставляли на 5 мин. 5. Промывали срезы в дистиллированной воде. Затем помещали их в закрытый контейнер, содержащий реактив D, и инкубировали в течение ночи. 6. Быстро промывали срезы в дистиллированной воде (3-4 сек). 7. Быстро дегидрировали в спиртах возрастающей концентрации, с одноминутной задержкой в абсолютном этаноле. Просветляли в ксилоле и заключали под покровное стекло. В результате астроциты, нейроглия, миелиновые волокна окрашивались в темно-голубой цвет. Коллаген, костный матрикс, хрящ принимали различные оттенки кирпично-красного цвета. 42 |