28 Для выявления муцинов препараты окрашивали муцикармином и альциановым синим рН 2,5, а также альциановым синим рН 2,5 ШИК реакция (PAS). При окраске муцикармином происходит выявление мукополисахаридов эпителиального происхождения (муцинов). В результате окраски мукополисахариды имели цвет от темнорозового до красного цвет, ядра сине-фиолетовый, остальные структуры прокрашивались в бледно-желтый цвет. Альциановый синий рН 2,5 использывали для выявления кислых мукополисахаридов. В результаты кислые мукополисахариды окрашивались в бирюзово-голубой цвет, ядра в красный. Интегрированный метод выявления кислых и нейтральных мукополисахаридов и углеводов в тканевых образцах проводится в два этапа. Для этого использывали окраску альциановым синим рН 2,5 ШИК реакция (PAS). В первой части процедуры окрашивания срезы обрабатываются альциановым синим, что приводит к окрашиванию кислыхмукополисахаридов с формированием нерастворимого синего пигмента Монастраля,. Затем проводится ШИК-реакция с окрашиванием нейтральныхмукополисахаридов и гликогена. В результате ШИК-положительные вещества окрашиваются в ярко-красный цвет, кислые мукополисахариды в бирюзовоголубой, некоторые эпителиальные мукополисахариды и хрящ — от пурпурного до темно-синего. Распределение материала по срокам эмбрионального развития и методам исследования представлены в таблице 1. Таблица 1. |
2.4. Методы исследования, использованные для ферментативной железы активности клеток околоушной изучения слюнной Выявление ферментов в клетках околоушной слюнной железы проводили у эмбрионов 18-20-ого дней, у новорожденных крысят на 1 и 2 сутки после рождения, а также у половозрелых крыс. Окраску срезов проводили готовыми стандартными наборами красителей производства компании Биовитрум. Для выявления муцинов препараты окрашивали муцикармином и альциановым синим рН 2,5, а также альциановым синим рН 2,5 ШИК реакция (PAS). При окраске муцикармином происходит выявление мукополисахаридов эпителиального происхождения (муцинов). Муцикармин обладает относительной специфичностью муцины фибробластов окрашиваются в очень небольшой степени. Существует мнение, что краситель реагирует с глюцидной частью мукопо л исахарид ов. В наборе содержатся следующие реактивы: А. Гематоксилин Майера, 30 мл В.Муцикармин Майера, 30 мл С. Раствор Метанилового желтого, 30 мл Окраску производили в следующем порядке: 1. срезы помещали в дистиллированную воду. 2. на срез наносили 10 капель реактива А, оставляли на 5 мин. 3. промывали срезы в дистиллированной воде. 4. подсинивали образцы в проточной воде в течение 5 мин. 43 G.Гематоксилин Майера, 30 мл Интегрированный метод выявления кислых и нейтральных мукополисахаридов и углеводов в тканевых образцах проводится в два этапа. В первой части процедуры окрашивания срезы обрабатываются альциановым синим, что приводит к окрашиванию кислых мукополисахаридов с формированием нерастворимого синего пигмента Монастраля, стабильного при дальнейшей обработке во второй половине процесса. Затем проводится ШИКреакция с окрашиванием нейтральных мукополисахаридов и гликогена (окрашивание гликогена произойдет только при отсутствии предварительной ферментной обработки препарата). 1. Помещали срезы в дистиллированную воду. 2. Наносили на срез 10 капель реактива А, оставляли на 30 мин. 3. Промывали срезы в дистиллированной воде, наносили на них 15 капель реактива В, оставляли наЮ мин. 4. Промывали под проточной водой 5 мин, затем в дистиллированной воде в течение 2 мин. 5. Наносили на срезы 10 капель реактива С, оставляли на 10 мин. 6. Промывали в дистиллированной воде. 7. Наносили 10 капель реактива D, оставляли на 20 мин. 8. Промывали срезы в дистиллированной воде. 9. Наносили на срезы 10 капель реактива Е, оставляли на 2 мин. 10. Сливали избыток реагента и наносии на срез 10 капель реактива F, оставляли на 3 мин. 46 11. Промывали срезы в дистиллированной воде. 12. Наносили на срезы 10 капель реактива G, оставляли на 2 мин. 13. Подсинивали образцы под проточной водой в течение 5 мин. 14. Дегидрировали в спиртах возрастающей концентрации, просветляли в ксилоле и заключали под покровное стекло. Таблица 1. Распределение материала по срокам эмбрионального развития и методам исследования s с. о ч ч сз X S го X S Фосфовольфрамовый гематоксилин о m S е и •х о о с н ч о s са i ч я п О) О. •Л S о. « я я я а я я я >> X U ЗЯ и ва о а. 14 15 16 17 18 19 20 21 Новорожд. Полово-зрел. Всего и о о Н S о U ч S о С а сз п. О 5 5 5 5 5 5 5 5 •л. S 3 X о я я я Л Лльциановый синий рН 2,5 ШИК-реакция (PAS) 5 5 5 5 20 Импрегнация серебром по Бильшовскому о о L. и ВО 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 И 5 ч < 25 25 25 25 25 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 20 25 40 40 15 15 260 40 40 40 40 40 20 В результате ШИК-положительные вещества окрашиваются в ярко-красный цвет, кислые мукополисахариды в бирюзово 47 |