|
2.3. Методики исследования 2.3.1. Люминесцентно-гистохимические методы определения биоамииов крови и слизистой оболочки желудка Материалом для исследований уровня биоаминов крови служили мазки-отпечатки крови, взятые из безымянного пальца левой руки. Наряду со специальным гистохимическим исследованием проведено цитологическое изучение мазков крови. Исследуемый материал окрашивали гематоксилин эозином по Ван Гизону. Цитологические данные показали изменения периферической крови в виде лейкоцитоза от 9x109 до 10хК)9 /л, палочкоядерного сдвига с яркими клиническими проявлениями болезни, а также увеличение количества эозинофилов от 0,405 х 109 /лдо 1,380 х 109/л у 14 человек. Для избирательного выявления алренопоглотцающих структур и серотонина в структурах крови и слизистой оболочке желудка использовали люминесцентно-гистохимический метод Фалька и Хилларна в модификации Е. М. Крохиной (1969). Гистамин определяли люминесцентногистохимическим методом Кросса, Эвена, Роста (1971), который предполагает соответствующую обработку материала с использованием ортофталевого альдегида. Цитофлуориметрию люминссцирующих структур проводили в люминесцентном микроскопе МЛ-2 с помощью насадки ФМЭЛ -1А (напряжение бООв; сопротивление 5хК)6 ом; зонд 0,5; с фильтрами 8 (525 нм) для серотонина, 7 (517 нм) для гистамина и 6 (480 им) для катехоламинов. Интенсивность свечения измеряли в условных единицах шкалы регистрирующего прибора. Установлено, что клеточные элементы крови были представлены в основном эритроцитами, полиморфноядерными лейкоцитами, лимфоцитами и тромбоцитами. В связи с этим изучение уровня биоаминов крови у здоровых лиц и сопоставление его с соответствующими показателями у больных проводили только в указанных выше клетках и плазме. 58 |
определяли как ТГ/2,2. Уровень холестерина липопротеидов низкой плотности ХС ЛПНП рассчитывали по формуле Фридвальда: ХС ЛПНП = общий ХС (ХС ЛПВП + ТГ/2,2). Таблица 3 Нормативные показатели липидного обмена Показатели Нормативы Общий холестерин 3,1-5,2 ммоль/л Триглицериды 0,4-1,82 ммоль/л ХС ЛПВП 0,9-1,68 ммоль/л ХС ЛПОНП 0,26-1,04 ммоль/л ХС ЛПНП 2,6-5,04 ммоль/л Индекс атерогеиности 2,6-2,9 Хиломикроны Отрицательные 2.2.5. Люминесцентно-гистохимические методы определения уровня бпоаминов крови Материалом для исследований служили мазки отпечатки крови, взятые из безымянного пальца левой руки. Наряду со специальным гистохимическим исследованием нами проведено также цитологическое изучение мазков периферической крови. Исследуемый материал окрашивали гематоксилин эозином по Ван Гизону. Для избирательного выявления адренопоглощающих структур и серотонина в структурах крови использовали люминесцентно-гистохимический метод Фалька и Хилларпа в модификации Е. М. Крохиной (1969). Гистамин определяли люминесцентно-гистохимическим методом Кросса, Эвена, Роста (1971), который предполагает соответствующую обработку материала с использованием ортофталевого альдегида. Цитофлуориметрию люминссцирующих структур проводили в люминесцентном микроскопе MJI2 с помощью насадки ФМЭЛ -1А (напряжение бООв; сопротивление 5x106 ом; зонд 0,5; с фильтрами 8 (525 нм) для серотонина, 7 (517 нм) для гистамина и 6 (480 нм) для катехоламинов. Интенсивность свечения измеряли в условных единицах шкалы регистрирующего прибора. Установлено, что клеточные элементы были представлены в основном эритроцитами, полиморфноядерными лейкоцитами, лимфоцитами и тромбоцитами. В связи с этим изучение уровня биоаминов у здоровых лиц и сопоставление его с соответствующими показателями у больных ИБС, ассоциированной с СД 2 типа, проводили только в указанных выше клетках и плазме. В мазках крови, обработанных методом Фалька и Хилларпа, у здоровых и больных смешанное свечение катехоламинов и серотонина выявляется в плазме, где оно имеет темно-зеленоватые гона. При обработке препаратов по этой методике при ориентировочной визуальной оценке катехоламины имеют зеленое свечение, а серотонин желто-оранжевое (приложение, фото 1-10). Эритроциты имеют овальную или округлую форму с включениями в цитоплазме неправильных гранул желто-зеленой люминесценции, или они встречаются в препарате частыми скоплениями. В некоторых из клеток обнаруживаются желтоватые центральные площадки (Гордон Д. С., 1985). В мазках имеются лимфоциты, клетки правильной округлой формы с диффузным свечением. ПМЯ-лейкоциты (палочкоядерные и сегментоядерные) имеют светящееся ядро и несколько более темную цитоплазму. В отдельных мазках мы наблюдали свечение эозинофилов и моноцитов. Тромбоциты встречались в виде мелких скоплений, они дезагрегированы. Биогенные амины (серотонин, катехоламины) были сосредоточены преимущественно в перечисленных выше клеточных элементах и плазме. При обработке препаратов по методу Кросса, Эвена, Роста малые концентрации гистамина дают голубоватую, средние зеленую, а большие желтую люминесценцию. В мазках крови плазма имеет различные оттенки свечения: от нежно-зеленого до ярко-желтого. Эритроциты выглядят как черные клетки правильной формы. Лимфоциты выглядят как клетки правильной округлой формы, которые дают диффузное желтое свечение. ПМЯ-лейкоциты имеют светлое ядро и более темную цитоплазму. Для получения озонированного раствора использовали аппарат УОТА«Медозон», с помощью которого озонокислородная газовая смесь пропускалась через флакон емкостью 200 мл со стерильным раствором 0,9 % раствором хлорида натрия в течение времени (30 мин.), необходимого для получения концентрации озона в растворе. Сеанс озонотерапии в количестве 10 процедур проводили через день. Проведение ОТ сопровождалось хорошей переносимостью процедур и отсутствием побочных эффектов. По проводимому лечению основная группа от сравниваемой отличалась только использованием ОТ. Перед началом лечения всем больным брали мазки-отпечатки периферической крови. Для избирательного выявления катехоламинов и серотонина в структурах крови использовали люминесцентногистохимический метод Фалька и Хилларпа в модификации Е.М. Крохиной (1969). Гистамнн определяли люминесцентно-гистохимическим методом Кросса, Эвена, Роста (1971). Цитофлуориметрию люминссцпрующих структур проводили в люминесцентном микроскопе МЛ-2 с помощью насадки ФМЭЛ-IA (напряжение 600 в; сопротивление 5х106 ом; зонд 0,5, с фильтрами 8 (525 нм) для серотонина; 7 (517 нм)) для гистамина и 6 (480нм) для катехоламинов. Интенсивность свечения измеряли в условных единицах шкалы регистрирующего прибора. Иммунологическое обследование включало определение CD3, CD4, CD8, CD72 методом проточной цитометрии с помощью моноклональных антител. Концентрацию сывороточных IgA, IgM, IgG определяли методом радиальной иммунодиффузии по Манчини. Определение фагоцитарного показателя (фагоцитарной активности и фагоцитарного числа) проводили с помощью тест-набора «Определение фагоцитоза». Параллельно этому проводили определение уровня циркулирующих иммунных комплексов. Эффективность различных методов лечения оценивали по клиниколабораторным, функциональным, гистохимическим данным и иммунологическим показателям. |