244 Подтвердили; что применение биологического моделирования описторхознои' инвазии на интактных котятах в высокой степени достоверности подтверждает результаты экспресс-микроскопического метода диагностики описторхоза и псевдамфистомотоза у рыб семейства карповых. Провели экспертную оценку разрешающей способности ИФАстрип с набором реагентов для выявления антител к антигенам описторхисов. Первые испытания метода в условиях региона проведены И.Е. Зюзиным (2001 г.). Закрытое АО «Вектор-Бест» (Новосибирская область, Кольцово, а/я 21) является крупнейшим в России производителем иммуноферментных диагностикумов, выпускает набор реагентов для дифференциального выявления антител к антигенам гельминтов методом иммуноферментного анализа-стрип. Активными компонентами этого набора реагентов являются антигены гельминтов, адсорбированные в лунках планшетов; иммуноглобулины диагностические против меченные пероксидазой хрена; контрольные отрицательная и диагностическая сыворотки. Способ определения антител к антигенам гельминтов представляет собой твердофазный иммуноферментный анализ, в ходе которого при взаимодействии происходит исследуемых образцов сыворотки антител конъюгата и крови с иммобилизированными в лунках планшетов антигенами гельминтов связывание специфических планшетов с образование против комплекса «антиген—антитело» на поверхности лунок. После удаления не связавшихся в лунках человека антител иммуноглобулинов пероксидазой хрена происходит JgY, положительная, включение ферментной метки в иммунный комплекс. В результате ферментной реакции, проведенной в лунках, отмытых от избыточного количества конъюгата, с субстратным раствором для пероксидазы, содержащим перекись водорода и 5-аминосалициловую кислоту (АСК), |
475 ной инвазии (в 1997 году в 19,4% случаев, в 1998г.в 28,2%, а в 1999 году в 24,5% случаев (от числа исследованных) установлено поражение рыб описторхисами. Биологическим исследованием на интактных котятах в 1997г. диагноз подтвержден в 61,1%) случаев, в 1998г. в 67,4%, а в 1999г. в 68,4% случаев. Разработана и сконструирована линейно-радианная схема-модель разрешающей способности микроскопического и биологического исследований при описторхозе в условиях Нижнего Поволжья (рис. 2.123). Установлено, что применение биологического моделирования описторхозной инвазии на интактных котятах в высокой степени достоверности подтверждает результаты экспресс-микроскопического метода диагностики паразитарной системы описторхоза и псевдамфистомотоза у рыб семейства карповых. Схема-модель разрешающей способности экспресс микроскопического и биологического исследований при описторхозе в условиях Нижнего Поволжья разработана впервые. 2.2.2.2.3.8.3. Иммунологические методы диагностики паразитарной системы описторхозной инвазии и их разрешающая способность. В производственных эпизоотологических экспериментах совместно с аспирантом И.Е. испытали набор реагентов для дифференциального выявления антител к антигенам гельминтов методом иммуноферментного анализа, выпускаемого ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирская область). Активными диагностические компонентами данного набора реагентов являются антигены гельминтов, адсорбированные в лунках планшетов; иммуноглобулины рицательная и диагностическая сыворотки. Способ определения антител к антигенам гельминтов представляет собой твердофазный иммуноферментный анализ, в ходе которого при взаимопротив Jg G, меченные пероксидазой хрена; контрольные положительная, от 476 действии исследуемых образцов сыворотки крови с иммобилизированными в лунках планшетов антигенами гельминтов происходит связывание специфических антител и образование комплекса «антиген-антитело» на поверхности лунок. После удаления не связавшихся в лунках планшетов коньюгата антител против иммуноглобулинов человека с пероксидазой хрена происходит включение ферментной метки в иммунный комплекс. В результате ферментной реакции, проведенной в лунках, отмытых от избыточного количества коньюгата, с субстратным раствором для пероксидазы, содержащим перекись водорода и 5-аминосалициловую кислоту (АСК), образуется окрашенный продукт, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации антител к антигенам гельминтов в анализируемом образце сыворотки. При скрининге сывороток на наличие в них антител к антигенам гельминтов рекомендуется использовать их разведение 1:100 и наносить исследуемые образцы в дубликатах. При определении титра антител следует использовать 4 последовательных двукратных разведения сывороток в интервале от 1:100 до 1:12800. В ходе эпизоотологического надзора за развитием инвазионного и эпизоотического процесса при паразитарной системе описторхоза у дефинитивных хозяев совместно со специалистами центра Госсанэпиднадзора проведен острый эксперимент на котятах (дефинитивных хозяевах (Opisthorhis felineus) с использованием данного метода. Исследования проведены в разные сроки после заражения котят мясом рыб, содержащим по 35-40 метацеркариев O.felineus, с последующим патологоанатомическим и гельминтологическим контролем при диагностическом убое подопытных и контрольных групп животных. Первоначально в холодильниках охлаждения проведен отбор проб свежеуснувших рыб частиковых пород, в количестве необходимом для проведения эксперимента. Рыбу предварительно исследовали на наличие в ней метацеркариев описторхисов. Ножницами разрезали чешую параллельно жаберной крышкой и параллельно спинному плавнику и нижней брюшной стенки. |