|
247 температуры 18-22° С, что позволяло избегать погрешностей в результатах анализа. Приготовление^ растворов № 1, № 2, раствора конъюгата ( № 3), раствора АСК (5-аминосалициловой кислоты), разведений контрольных сывороток, а также подготовку исследуемых сывороток проводили в четкой последовательности и регламентах, указанных в документации, приложенной изготовителем к диагностическому набору. Приготовленные реагенты, как правило, использовали сразу ж е , без последующего хранения. Проведение иммуноферментного анализа (подготовка планшетов, внесение контрольных и испытуемых образцов, внесение конъюгата и АСК) проводили при строгом соблюдении рекомендуемого температурного режима (18—22° С). Регистрацию и оценку результатов при скрининге сывороток проводили визуально: Оценку результатов проводили только в случаях, если окраска субстратной смеси в лунках с контрольной положительной сывороткой имела коричневый цвет, а в лунках с контрольной отрицательной сывороткой и без сыворотки (контроль конъюгата) — бесцветная или слабо-розовая. сыворотку При визуальном положительно учете результатов исследуемую если считали реагирующей с антигеном, обусловленная его окраска субстратной смесью была более интенсивна, чем в лунках с диагностической контрольной сывороткой на стрипах с этим же антигеном. При определении титра антител в испытуемой сыворотке за титр ИФА к используемому антигену принимали то наибольшее разведение сыворотки, при котором окраска субстратной смеси более интенсивна, чем в лунках с диагностической контрольной сывороткой в разведении 1:100 (табл. 2.37). Установлено, что в первой подопытной группе через 12 дней после заражения результат ИФА с описторхозным антигеном отрицательный, при |
478 пользовали подогретыми до температуры 18 22°С, что позволяло избегать погрешностей в результатах анализа. Приготовление растворов №1, №2, раствора коньюганта (раствор №3), раствора АСК (5-аминосалициловой кислоты), разведений контрольных сывороток, а также подготовку исследуемых сывороток проводили в четкой последовательности и регламентах, указанных в документации, приложенной изготовителем к диагностическому набору. Приготовленные реагенты, как правило, использовали сразу же, без последующего хранения. Проведение иммуноферментного анализа (подготовка планшентов, внесение контрольных и испытуемых образцов, внесение коньюгата, внесение АСК) проводили при соблюдении рекомендуемого температурного режима (18 ITC). Регистрацию и оценку результатов при скрининге сывороток проводили визуально. Оценку результатов проводили только в случаях, если окраска субстратной смеси в лунках с положительной контрольной сывороткой имела коричневый цвет, а в лунках с отрицательной контрольной сывороткой и без сыворотки (контроль коньюгата) бесцветная или слабо-розовая. При визуальном учете результатов исследуемую сыворотку считали положительно реагирующей с антигеном, если обусловленная его окраска субстратной смесью была более интенсивна, чем в лунках с диагностической контрольной сывороткой на стрипах с этим же антигеном. При определении титра антител в испытуемой сыворотке за титр ИФА к используемому антигену принимали то наибольшее разведение сыворотки, при котором окраска субстратной смеси более интенсивна, чем в лунках с диагностической контрольной сывороткой в разведении 1:100 (табл. 2.81), Установили, что в первой подопытной группе через 12 дней после заражения результат ИФА с описторхозным антигеном отрицательный, при диагностическом убое подопытных котят и проведении гельминтологического и патанатомического вскрытия половозрелых форм O.felineus и псевдамфистом не обнаружено. |