|
1 V ъ} i& процентах и абсолютных числах; индекс CD4+/CD8+ представлял собой отношение процентного содержания этих клеток в крови. Это позволяет получить информацию о субтипе лимфоцитов, стадии их дифференцировки и* активации. Выявляли Т-лимфоциты (CD3+), Т-хелперы/индукторы (CD4+), Тцитотоксические/супрессорные клетки (CD8+), натуральные киллеры (CD16+), зрелые* В-лимфоциты (CD19+), активированные лимфоциты (HLA-DR+) и * 1 V лимфоциты, экспрессирующие специализированный рецептор сигналов к антиген (CD 95+). Учет результатов>проводили синдукции апоптоза Fas Т помощью люминисцентного микроскопа, определяя процент светящихся клеток«из 200 подсчитанных. $ г Мононуклеарные клетки выделяли из гепаринизированной крови (25 ЕД/мл) с помощью центрифугирования в градиенте плотности Фиколл*2 верографина (S = 1,077 г/см ) по*стандартной методике (Фримель, 1987 г.). Л J Для выделения фенотипа использовали моноклональные антитела к CDV антигенам лимфоцитов человека и меченные FITC Fab фрагменты ) антимышинных иммуноглобулинов производства НПФ «МедБиоСпектр», Россия. Состояние системы гуморального иммунитета h& Для оценки функционального состояния системы гуморального Я * I j V иммунитета использовали количественное определение иммуноглобулинов сыворотке крови. Исследование основных классов иммуноглобулинов (A, G, М) осуществлялось методом*простой радиальной иммунодиффузии в агаровом геле по Манчини (Manchini G. et al., 1965) в модификации Фехея (Fehey et al.,1965) с использованием моноспецифических антисывороток против иммуноглобулинов человека, выпускаемых Нижегородским предприятием по производству бактерийных препаратов; результаты выражали в г/л. Определение циркулирующих иммунных комплексов. Ревматоидный и ювенильный идиопатический артриты являются классическим проявлением иммунокомплексной патологии, связанной с нарушением клиренса и отложением циркулирующих иммунных комплексов |
40 I стадия эпифизарный остсопороз. II стадия эпифизарный осгеопороз, разволокнение хряща, сужение суставной щели, единичные эрозии. III стадия деструкция хряща и кости, выраженное сужение суставной щели, формирование костно-хрящевых эрозий, подвывихи в суставах. TV стадия —критерии третьей стадии в сочетании с фиброзным или костным анкилозом. Рентгенологическое обследование проводилось каждые 6-12 месяцев. Все дети были осмотрены окулистом, отоларингологом. Иммунологические исследования Оценка состояния клеточного иммунитета. Для диагностики и прогнозирования аутоиммунных заболеваний необходимо изучение периферических и тканевых лимфоцитов и их субпопуляций. Идентификацию лимфоцитов и их субпопуляций проводили стандартным методом иммунофлюоресцентного анализа с использованием моноклональных антител к их поверхностным антигенам (CD). С помощью данного .метода можно осуществлять одномоментное определение двух и более поверхностных молекул на каждой из исследуемых клеток. Это позволяет получить информацию о субклассе лимфоцитов, стадии их дифференцировки и активации. М’ононуклеарныс клетки выделяли из гепаринизированной крови (25 ЕД/мл) с помощью центрифугирования в градиенте плотности Фиколлаерографина (S = 1.077 г/смл) по стандартной методике (Фримель, 1987г.). Для выделения фенотипа использовали моноклональные антитела к CDантигенам лимфоцитов человека и меченные FITC Fab фрагменты антимышииных иммуноглобулинов производства НПФ «МедБиоСпектр», Россия. 41 Выявляли Т-лимфоциты (CD3+), Т-хслперы/индукторы (CD4+), Тг цитотоксическис/супрессорные клетки (CD8+), натуральные киллеры (CD 16+), зрелые В-лимфоциты (CD 19+), активированные лимфоциты (HLADR+) и лимфоциты, экспрессирующие специализированный рецептор сигналов к индукции апоптоза Fas-антиген (CD95+). Учет результатов проводили с помощью люминисцеитного микроскопа, определяя процент светящихся клеток из 200 подсчитанных. Состояние системы гуморального иммунит ета Для оценки функционального состояния системы гуморального иммунитета использовали количественное определение иммуноглобулинов сыворотке крови. Исследование основных классов иммуноглобулинов (A, G, М) осуществлялось метолом простой радиальной иммуподиффузии в агаровом теле по Манчини (Manchini G. et al., 1965) в модификации Фехея (Fehey et al.,1965) с использованием моноспецифических аптисывороток против иммуноглобулинов человека. Определение циркулирующих иммунных комплексов Ювенильный идиопагический артрит является классическим проявлением иммунокомплексной патологии, связанной с нарушением клиренса и отложением циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в тканях. При этом ЦИК обладают определенной структурой и зарядом, которые позволяют им связываться с заряженными биомолекулами органов мишеней. Для определения ЦИК использовался полиэтилен-гликоль (11ЭГН 6000). В низкой концентрации он преципитирует преимущественно растворимые комплексы антиген —антитело с различной молекулярной массой. Оценку содержания ЦИК проводили методом спектрофотометрии, основанном на прямой регистрации потери проходящего света или интенсивности светорассеяния при добавлении ПЭГ с помощью спектрофотометра. Содержание ЦИК рассчитывали по формуле: ЦИК = (Дк До) х 100% / Дк. |