|
РФ определяли с помощью реакции латекс-агглютинации (частицы латекса, нагруженные IgG человека). Использовали готовый диагностикум РФ, приготовленный на основе частиц латекса, нагруженных у-глобулином человека. Положительным латекс-тест считался при титре 1:40. РФ обладает высокой чувствительностью и специфичностью, однако у детей, в отличие от взрослых, он обнаруживается в сыворотке крови значительно реже (15-20% против 75-80%). Определение цитокинового профиля. Важная роль в регуляции активности иммунной системы отводится большой группе цитокинов, обладающих как провоспалительным, так и противовоспалительным действием. Методом иммуноферментного анализа с применением наборов реагентов, выпускаемых ООО «Протеиновый контур» (г. Санкт-Петербург, 2006г.), определяли уровни следующих цитокинов: ИЛ-1,ИЛ4, ИЛ-6, ФНО-а. Для оценки внутриклеточного синтеза цитокинов мононуклеары периферической крови получали путем выделения на градиенте плотности фиколлверографина (1,077 г/смЗ). Спонтанную продукцию ФНО —а Тлимфоцитами оценивали по истечении 4 часов инкубации в присутствии брефельдина А при 37°С, в атмосфере 5% С02. В качестве активатора для симуляции внутриклеточного синтеза использовали PMA(«Sigma», 50 ng/ml) плюс иономицин («Sigma», 1 pg/ml). Иммунофенотипирование проводили с использованием ФИТЦ-меченых анти-CDS-моноклональных антител (ООО «Сорбент», г. Москва) реконъюгированных анти-ИЛ4-, и ФНО-а-антител («Caltag»). Методы статистического анализа. Полученные в ходе работы данные регистрировались в специально разработанных индивидуальных картах с одновременным кодированием для последующей обработки на персональном компьютере. Карта заполнялась на каждого пациента и включала данные анамнеза заболевания и анамнеза жизни, особенности клинического течения суставного синдрома, данные |
42 Исходя из формулы расчета, уровень ЦИК в сыворотке крови тем больше, чем меньше значение полученного показателя. Состояние системы комплемента Определение комплемента сыворотки проводилось гемолитическим способом и основано на его способности лизировать эритроциты барана, сенсибилизированные кроличьими антителами. Сз компонент комплемента определялся по реакции 50% гемолиза. Исследование системы комплемента у больных иммунокомплексными заболеваниями показательно в плане оценки эффективности лечения. Ревматоидный фактор (РФ) РФ является своеобразным маркером аутоиммунных нарушений у больных ЮИА. Серопозитишюсть и высокие титры РФ коррелируют с тяжестью, быстротой прогрессирования патологического процесса и развитием системных проявлений при ЮИА. РФ обладает способностью агглютинировать эритроциты, предварительно обработанные v-глобулином. На этом свойстве основаны почти все реакции, предложенные для его обнаружения. РФ определяли с помощью реакции латекс-агглютинации (частицы латекса, нагруженные IgG человека). Использовали готовый диагностикум РФ. приготовленный на основе частиц латекса, нагруженных у-глобулином человека. Положительным латекс-тест считался при титре 1:40. РФ обладает высокой чувствительностью и специфичностью, однако у детей, в отличие от взрослых, он обнаруживается в сыворотке крови значительно реже (15-20% против 75-80%). Определение цнгокинового профиля Важная роль в регуляции активности иммунной системы отводится большой группе цитокинов, обладающих как провосиалительным, так и противовоспалительным действием. Методом иммуноферментного анализа с применением наборов реагентов, выпускаемых ООО «Протеиновый контур» 43 (г.Саикт-Петербург), определяли уровни следующих цитокинов: ИЛ-1, ИЛ-4, ИЛ-6, ФНО-а. Для оценки внутриклеточного синтеза цитокинов монопуклеары периферической крови получали путем выделения на фадиенте плотности фиколлверографина (1,077 r/смЗ). Спонтанную продукцию ИЛ-6 Тлимфоцитами оценивали по истечении 4 часов инкубации в присутствии брефельдина А при 37°С, в атмосфере 5% С02. В качестве активатора для симуляции внутриклеточного синтеза использовали PMA(«Sigma>>, 50 ng/ml) плюс иономицин («Sigma», 1 pg/ml). Иммунофенотипирошшие проводили с использованием ФИТЦ-мсченых апти-СОЗ-моноклональных антител (ООО «Сорбент», г. Москва) реконъюгированных анти-ИЛ-6 («Caltag»). Состояние гипоталамо-гипофизарно-надпочечпиковой системы. Функциональное состояние ГГНС оценивалось базальному уровню в сыворотке крови следующих гормонов: АКТГ (передняя доля гипофиза) и кортизола (кора надпочечников). Содержание гормонов в сыворотке крови определялось иммуноферментным методом но стандартным методикам. Забор крови для данного исследования проводился из локтевой вены в 8 часов утра. Методы статистического анализа Полученные в ходе работы данные регистрировались в специально разработанных индивидуальных картах с одновременным кодированием для последующей обработки на персональном компьютере. Карта заполнялась на каждого ребенка и включала данные анамнеза заболевания и анамнеза жизни, особенности клинического течения суставною синдрома, данные лабораторного, инструментального, серологическою, иммунологического и морфометрического исследований. Статистическая обработка полученных данных проводилась на персональном компьютере с помощью пакета прикладных программ «Microsoft Office» и «Statistic» 6.0». Использовали методы математической статистики: расчет средних величии, |