|
37 производился из цервикального канала цитологической щеточкой (Cytobrush), в пробирке доставлялся в лабораторию, где подвергался обработке лизирующим буферным раствором. Затем анализируемый образец вносился в предварительно подготовленную реакционную буферную среду, содержащую оптимальные концентрации праймеров, дезоксирибонуклеотилтрифосфатов и Taq-полимеразу. Смесь тщательно перемешивалась и помещалась в термоциклер для осуществления амплификации. Визуализация результатов амплификации производилась с помощью метода горизонтального электрофореза в агарозном геле. После завершения электрофореза образец помещали на фильтр трансиллюминатора, излучающего свет в ультрафиолетовом диапазоне, фотографировали флюоресценцию продуктов реакции и в последующем оценивали результат по полученной фотографии. Улыпрасоиографический метод исследования органов малого таза. Данное исследование произведено всем пациенткам в реальном масштабе времени на ультразвуковом аппарате “Aioka CCD-500” с использованием вагинального датчика частотой 5 МГц. Оценивали состояние шейки матки, толщину и однородность эндоцервикса; положение, величину и форму тела матки, состояние эндои миометрия, особое внимание уделяли диагностике таких патологических процессов, как гиперплазия эндометрия, хронический эндометрит, миома матки, аденомиоз; при исследовании придатков, помимо наличия признаков воспалительного процесса, оценивали состояние яичников (их размеры, положение, наличие или отсутствие признаков фоллпкулогенеза); определяли выраженность спаечного процесса в малом тазу. Допплерометрическое исследование сосудов матки. Исследование кровотока проводилось в следующих сосудах: в маточных артериях (МА), радиальных артериях (РА) и в спиральных артериях (СА). Для правильного определения контрольного объема при исследовании и идентификации |
45 производилось с использованием ПЦР. Больные были обследованы на выявление специфических фрагментов ДНК уреаплазмы, микоплазмы, хламидии, гонореи, кандиды, гарднереллы, трихомонады, вируса папилломы человека, вируса простого герпеса. Забор материала для исследования производился из цервикального канала цитологической щеточкой (Cytobrush), в пробирке доставлялся в лабораторию, где подвергался обработке лизирующим буферным раствором. Затем анализируемый образец вносился в предварительно подготовленную реакционную буферную среду, содержащую оптимальные концентрации праймеров, дезоксирибонуклеотилтрифосфатов и Taq-полимеразу. Смесь тщательно перемешивалась и помещалась в термоциклер для осуществления амплификации. Визуализация результатов амплификации производилась с помощью метода горизонтального электрофореза в агарозном геле. После завершения электрофореза образец помещали на фильтр трансиллюминатора, излучающего свет в ультрафиолетовом диапазоне, фотографировали флюоресценцию продуктов реакции и в последующем оценивали результат по полученной фотографии. 2.2.3. Исследование гормонального профиля. Функциональное состояние гипотапамо-гипофизарно-яичниковой системы изучалось на основании измерения базальной температуры, определения содержания гормонов в периферической крови методом ИФА с помощью стандартных наборов отечественных и зарубежных фирм в лаборатории МСЧ№1 АМО ЗИЛ, лаборатории Центра Иммунологии и Репродукции. Гормональное исследование проводили на 5-7 и 21-22 дни менструального цикла. Нормативными считались следующие показатели (соответственно для I и II фазы менструального цикла): ЛГ: 6,0-7,9 и 5,8-8,1 МЕ; ФСГ: 3,3-4,1 и 2,3-3,0 ME; пролактин: 243-299 и 257-320 ММЕ; эстрадиол: 228-292 и 502-588 нмоль; прогестерон; 1,8-2,2 и 23-32 нмоль; 46 тестостерон 1,5-1,9 и 1,6-1,8 нмоль; кортизол: 321-377 и 315-375 нмоль; дегидроэпиандростерон: 29-35 и 20-28 нмоль. 2.2.4. Ультрасонографичсский метод исследования органов малого таза. Данное исследование произведено всем пациенткам в реальном масштабе времени на ультразвуковом аппарате “Aloka CCD-500” с использованием вагинального датчика частотой 5 МГц. Оценивали состояние шейки матки, толщину и однородность эндоцервикса; положение, величину и форму тела матки, состояние эндои миометрия, особое внимание уделяли диагностике таких патологических процессов, как гиперплазия эндометрия, хрошгческий эндометрит,' миома матки, аденомиоз; при исследовании придатков, помимо наличия признаков воспалительного процесса, оценивали состояние яичников (их размеры, положение, наличие или отсутствие признаков фолликулогенеза); определяли выраженность спаечного процесса в малом тазу. 2.2.5. Исследование крови для выявления аллельного полиморфизма гена GP-Ша. Получение ДНК-матрицы из периферической крови. 1. 200 мкл крови (непосредственно при взятии от больного) добавляли в пробирку, содержащую 50 мкл 50 мМ раствора Na-ЭДТА (pH 8,0). В таком виде кровь хранится 35-45 суток в бытовом морозильнике (ок.-12 С). 2. К 250 мкл смеси крови и раствора Na-ЭДТА (pH 8,0) добавляли равный объем раствора, содержащего 0,1% тритон Х-100 и 0,15 М NaCl, перемешивали и инкубировали 15-20 мин. при комнатной температуре. 3. Полученную смесь центрифугировали 15 мин. при 12 тыс. об/мин. на центрифуге «Эппендорф». Супернатант отбрасывали. 4. Осадок суспендировали в 200 мкл раствора, содержащего 0,1% тритон Х-100. |