|
39 разведенных контрольной сыворотки и анализируемых проб сыворотки крови и инкубации устанавливается равновесие между связанными и свободными антителами к соответствующим антигенам. После удаления содержимого лунок и внесения в них раствора конъюгата кроличьих антител к IgG человека с пероксидазой хрена на связанных антителах происходит сорбция молекул конъюгата в количестве, прямо пропорциональном количеству связавшихся антител. После удаления избытка несвязанного конъюгата производится ферментативная реакция для определения активности пероксидазы, входящей в состав конъюгата. Оценка проводится фотометрически при длине волны 492 нм, после чего рассчитывается относительная иммунореактивность определяемых антител в пробах, выраженная в процентах от иммунореактивности контрольной сыворотки. В работе использовались следующие оценочные критерии: нормореактивность интенсивность реакции исследуемой сыворотки с любым из изучаемых белков-антигенов, составлявшей 5-40% от интенсивности реакции сыворотки-эталона; гипсрреактпвность интенсивность реакции исследуемой сыворотки с любым из белков, составлявшей 41% и более от интенсивности реакции сыворотки-эталон а; гипоактивность интенсивность реакции исследуемой сыворотки с любым из изучаемых белков ниже значений нормы реакции. Определение содержания эндометриального белка а2-микроглобулина фертильности (АМГФ) в менструальной крови. Женщины самостоятельно собирали 2 мл менструальной крови. В лаборатории Научноисследовательского института морфологии человека РАМН (зав. лаб. д.м.н. М.Н. Болтовская) полученный материал центрифугировали в течение 5 минут при 2500 об/мин, получали плазму крови для определения АМГФ. 96луночные планшеты («Costar») сенсибилизировали моноклональными антителами против АМГФ (10 мкг/мл) на карбонат-бикарбонатном буфере |
50 2.2.6. Иммунологический метод определения содержания эмбриотропных аутоантител в сыворотке крови (ELISA-test). С целью изучения сывороточной иммунореактивности, отражающей количество и аффинность некоторых видов естественных эмбриотропных аутоантител, взаимодействующих с белками-регуляторами эмбриогенеза нами был применен метод «ЭЛИ-П-Тест» (ELISA-detected Probably of pathology), основанный на стандартном иммуноферментном анализе. Определялись антитела к следующим антигенам: ОБМ (антиген-1) основному белку миелина, участвующему в регуляции созревания нервных волокон и гемопоэтических клеток; S100 (антиген-2) белку, участвующему в регуляции миграции нейробластов головного и спинного мозга и их функциональной дифференцировке; АСВР-14/18 (антиген-3) кислому белку, прочно связанному с хроматином, участвующему в регуляции экспрессии генов; МР-65 (антиген-4) мембранному белку, относящемуся к суперсемейству интегринов, участвующему в регуляции межклеточной адгезии. В работе использовались диагностические наборы «ЭЛИ-П-Тест». Постановка реакций проводилась согласно инструкции к наборам, утвержденной М3 РФ (1999) в лаборатории молекулярной медицины Медико-экологического фонда «Чернобыль-Тест». Принцип работы прибора состоит в следующем. В лунках планшета, на поверхности которых сорбированы антигены 1, 2, 3 и 4, после добавления разведенных контрольной сыворотки и анализируемых проб сыворотки крови и инкубации устанавливается равновесие между связанными и свободными антителами к соответствующим антигенам. После удаления содержимого лунок и внесения в них раствора конъюгата кроличьих антител к IgG человека с пероксидазой хрена на связанных 51 антителах происходит сорбция молекул конъюгата в количестве, прямо пропорциональном количеству связавшихся антител. После удаления избытка несвязанного конъюгата производится ферментативная реакция для определения активности пероксидазы, входящей в состав конъюгата. Оценка проводится фотометрически при длине волны 492 нм, после чего рассчитывается относительная иммунореактивность определяемых антител в пробах, выраженная в процентах от иммунореактивности контрольной сыворотки. В работе использовались следующие оценочные критерии: нормореактивность интенсивность реакции исследуемой сыворотки с любым из изучаемых белков-антигенов, составлявшей 540% от интенсивности реакции сыворотки-эталона; гиперреактивность интенсивность реакции исследуемой сыворотки с любым из белков, составлявшей 41% и более от интенсивности реакции сыворотки-эталона; гипоактивность интенсивность реакции исследуемой сыворотки с любым из изучаемых белков ниже значений нормы реакции. 2.2.7. Определение содержания эндометриального белка а2микроглобулина фертильности (АМГФ) в менструальной крови. Женщины самостоятельно собирали 2 мл менструальной крови. В лаборатории Научно-исследовательского института морфологии человека РАМН (зав. лаб. д.м.н. М.Н. Болтовская) полученный материал центрифугировали в течение 5 минут при 2500 об/мин, получали плазму крови для определения АМГФ. 96-луночные планшеты («Costar») сенсибилизировали моноклональными антителами против АМГФ (10 мкг/мл) на карбонат-бикарбонатном буфере pH 9,5. В лунки вносили по 100 |