Методика определении концентрации МЕСХ методом ВЭЖХ с использованием диодно-матричного детектора (методика, использованная в работе). Используемые реактивы и оборудование. В работе используется хроматографическая система: высокоэффективный жидкостной хроматограф модели НРЬС-ЮАур (ЗЫтабги Со., Ьи1., КуоЮ, .1арап), оборудованный диодно-матричным детектором 8РЭ-М10А ($Ытас1/.и Со., Ыб., .1арап) и инжектором ЯНеобупе модели 77251 с петлей ввода на 20 мкл (ЯНеобупе, Со1аб, СА 94928), хроматографическая колонка колонка 8ире1со$П ЬСю 4,6* 150 со средним размером частиц 5 рт. Элюент: был подобран оптимальный состав мобильной фазы 87% ацетонитрила и 13% калийфосфатного буфера 0,05М раствор КН2Р04 (рН=2.6) позволяющий определять изучаемые вещества с необходимой чувствительностью и селективностью В качестве внутреннего стандарта используется субстанция МРОХ в виде спиртового раствора с концентрацией 500 нг/мл. Последовательность этапов методики: 1. Приготовление растворов: все растворы приготовляются непосредственно в день исследования, методом последовательного разведения до нужной концентрации. Для приготовления 0,05М калийфосфатного буфера навеску калия дигидрофосфата безводного (х.ч.) 6,08 г растворить в 1 литре дистиллированной воды при перемешивании. Значение рН полученного раствора должно приближаться к 2,6 при необходимости довести рН до необходимого значения при помощи раствора ортофосфорной кислоты. Для приготовления раствора МРСХ 10000 нг/мл, навеску 2,5 мг растворить в 5 мл этанола интенсивно перемешивают, полученный раствор с концентрацией 500 мкг/мл необходимо разбавить этанолом в 20 раз, для достижения необходимой концентрации. 2. Пациенту вводится лидокаин (производства копании Е§1$) в дозе 1 мг/кг массы тела в кубитальную вену, растворенный в 10 мл изотонического 75 |
101 Методика определения концентрации МЕСХ методом В')ЖХ с использованием диодно-матричного детектора (методика, использованная в работе). Используемые реактивы и оборудование. В работе используется хроматографическая система: высокоэффективный жидкостной хроматограф модели НРЬС-ЮАур (8Ыша^2и Со., 1Дс1., КуоЮ, Зарап), оборудованный диодно-матричным детектором 8РО-МЮА (ЗЫтасйш Со., 1Дс1., ]арап) и инжектором К.Ьеос1упе модели 77251 с петлей ввода на 20 мкл (КЬсос1упе, Со1аП, СА 94928), хроматографическая колонка 8ире1со8И ЬС-8 (7.5ст х 4.6тт со средним размером частиц 3 ит). Элюент калийфосфатный буфер 0,05М раствор КН2РОь рН = 4,0 и ацетонитрил для ВЭЖХ в соотношении 85:15. В качестве внутреннего стандарта используется триметоприм в виде спиртового раствора с концентрацией 5 мкг/мл. Последовательность этапов методики: 1. Приготовление растворов: все растворы приготовляются непоредствеино в день исследования, методом последовательного разведения до нужной концентрации. Для приготовления 0,5М калий фосфатного буфера навеску калия дигидрофосфата безводного (х.ч.) 4,08 г растворить в 1 литре дистиллированной воды при перемешивании. Значение рН полученного раствора должно приближаться к 4,0 при необходимости довести рН до необходимого значения при помощи раствора ортофосфорной кислоты. Для приготовления раствора триметоприма 5 мкг/мл, навеску 2,5 мг растворить в 50 мл этанола при интенсивном перемешивании и нагреве до 40-50°С, полученный раствор с концентрацией 100 мкг/мл необходимо разбавить этанолом в 20 раз, для достижения необходимой кон цен грации. 2. Пациенту вводится лидокаин (производства копании Е&1$) в дозе 1 мг/кг массы тела в кубитальную вену, растворенный в 10 мл изотонического раствора, медленно. Затем, через 15 минут из другой кубитальной вены осуществляется забор крови в количестве 10 мл в пластиковую пробирку, содержа |