|
протяжении 8 часов у исследуемого собиралась моча, из которой бралось 20 мл аликвоты (час ть образца биопробы, взятая для анализа). Затем аликвота немедленно замораживалась и хранилась в морозильной камере не более 30 суток при температуре -20оС. Перед проведением хроматографического анализа каждая аликвота размораживалась на водяной бане при температуре 35оС до достижения температуры 35оС. Концентрация лозартана и его метаболита в моче определялась с использованием хроматографа ВЫтасЗги: детектор КР10Ах1 (с поглощением на 250 нм и излучением на 370 нм для лозартана и его метаболита ЕХР3174), помпа 1Х20АО, термостат СТО20А, дегазатор 001320 АЗ, петля ввода «ЯЬеобупе» объемом 20 мкл, хроматографическая колонка «2огЬах 8В-РНепу1» 4,5* 150. Определение концентрации лозартана и его метаболита ЕХР3174 определяли по методике предложенной Уаваг С1. с соавторами (Уаяаг II., Ког51ипс1-Вег§еп§геп С., ТуЪпп§ О. е( а1., 2002). Для экстракции веществ 1 мл аликвоты смешивали с подвижной фазой, состоящей из 15 мМ Ыа2Р04 с рП 2.3 и ацетонитрила в объемном отношении 66/34 соответственно, и изопропанолом (в объемном соотношении 2/1/1). В дальнейшем, 20 мкл данного рас твора использовали для хроматографического анализа. Условия выполнения: скорость подвижной фазы 1,5 мл/мин, температура 35оС. Время выхода лозартана 8,5±0,3 минуты, его метаболита ЕХР3174 13,3±0,25 минуты. Субстанция метаболита лозартана ЕХР3174 для постройки калибровочных кривых была синтезирована на кафедре фармацевтической и токсикологической химии Волгоградского государственного медицинского университета д.х.н., профессором Озеровым А.А. по методике предложенной Сухановым Я.В. (Суханов Я.В., 2005 г.). Нижний порог определяемых концентраций лозартана составил 20нг/мл, а его метаболита ЕХР3174 10 нг/мл. Внутридневные и междневные колебания для лозартана составили менее 8%, для его метаболита ЕХР3174 менее 12%. После определения концентраций лозартана и метаболита ЕХР3174 рассчитывалось их отношение: концентрация лозартана (Слоз) к концентрации его метаболита 78 |
60 рального приема лозартана в однократной дозе 25 мг перед сном, через 2 часа после приема пищи. Кроме того, определялась концентрация лозартана и ЕХРЗ174 концентраций лозартана в суточной моче (по прошествии24 часов с момента перорального приема). » После приема 25 мг лозартана, на протяжении 8 часов у исследуемого собиралась моча, из которой бралось 20 мл аликвоты, (часть образца1 биопробы, взятая для анализа). Затем аликвота немедленно замораживалась и хранилась в морозильной камере не более 30 суток при температуре -20°С. Перед проведением хроматографического анализа каждая-аликвота размораживалась на водяной бане при температуре 35°С до достижения температуры 35°С. Концентрация> лозартана и его метаболита в моче определялась с использованием хроматографа 8Ытас1ги: детектор ЯРЮАх! (с поглощением на 250 им и излучением на 370 им для лозартана и. его метаболита’ЕХРЗ 174), помпа ЬС20АО; термостат СТО20А, дегазатор ОСШ20АЗ, петля ввода «КЬеобупе» объемом 20 мкл, хроматографическая колонка «2огЬах 8В-РЬепу1» 4,5*150. Определение концентрации лозартана и его метаболита ЕХРЗ 174 определяли по методике предложенной Уазаг И с соавторами (Уазаг 13., Рогз1ипё-Вег§еп§геп С., ТуЬпп§ О. е1 а!., 2002). Для экстракции веществ 1 мл аликвоты смешивали с подвижной фазой, состоящей из 15 мМ Иа2Р04 с рН 2.3 и ацетонитрила в объемном отношении 66/34 соответственно, и изопропанолом (в объемном соотношении 2/1/1). В дальнейшем, 20 мкл данного раствора использовали для хроматографического анализа. Условия выполнения: скорость подвижной фазы 1,5 мл/мин, температура 35°С. Время выхода лозартана 8,53:0,3 минуты, его метаболита ЕХРЗ 174 13,33:0,25 минуты. Субстанция метаболита лозартана ЕХРЗ 174 для постройки калибровочных кривых была синтезирована на кафедре фармацевтической и токсикологической химии Волгоградского государственного медицинского университета д.х.н., профессором Озеровым А.А. по методике предложенной Сухановым Я.В. (Суханов Я.В., 2005 г.). Нижний 61 порог определяемых концентраций лозартана составил 20нг/мл, а его метаболита ЕХР3174 10 нг/мл. Внутридневные и междневные колебания для лозартана составили менее 8%, для его метаболита ЕХР3174 менее 12%. После определения-концентраций лозартана и метаболита ЕХР3174 рассчитывалось их отношение: концентрация лозартана (Слоз) к концентрации его метаболита ЕХР3174 (Сехр). Определение конкретных фенотипов изофермента СУР209 по этим соотношениям проводилось согласно данным Уазаг II. (2002). Соотношение Слоз/Сехр находившееся в интервале 50,2±30,5 считали соответствующим фенотипу СУР2С9*3/*3 («медленный» фенотип). Соотношение Слоз/Сехр находившееся в интервале 3,7x1,1 считали соответствующим фенотипу СУР2С9*2/*3 («медленный» фенотип). Соотношение Слоз/Сехр находившееся в интервале 2,0*0,6 считали соответствующим фенотипу СУР2С9*1/*3 («медленный» фенотип). Соотношение Слоз/Сехр составлявшее менее 1,4 считали соответствующим фенотипу СУР2С9*1/*1-СУР2С9*1/*2-СУР2С9*2/*2 («быстрый» фенотип). 2.2.2. Оценка состояния углеводного обмена Состояние углеводного обмена оценивалось комплексно по нескольким критериям: Показатели гликемии натощак, постпрандиальной гликемии и глюкозотолерантного теста, использовались для верификации диагноза сахарного диабета типа 2. Показатели гликемии натощак, гликемии через 2 часа после приема пищи гликемии перед сном и гликировапного гемоглобина, позволили оценить компенсацию углеводного обмена. Гликемия натощак (Дедов И.И., Шестакова М.В., 2009) проводили у пациентиов после предваврительного голодания в теччении не менее 8 часов и не более 14 часов. Уровень глюкозы определяли в цельной капиллярной крови из пальца с помощью портативного глюкомегра «Акку |