|
ЕХР3174 (Сехр). Определение активности изофермента СУР2С9 по этим соотношениям проводилось согласноданным Уазаг 11 (2002). 3.3 Оценка функционального состояния печени. Оценка функционального состояния печени осуществлялась с использованием определения в крови печеночноспёцифических ферментов и маркеров функциональной активности печени, таких как общий билирубин, АлАТ, АсАТ, щелочная фосфатаза. Уровень ЩФ оценивался по методу Всззеу и Ьо\Угу при помощи диагностического набора Ольвекс Диагностикум. Образец плазмы крови (0,05 мл, не позднее 4 часов после забора) помещали в кювету спектрофотометра и добавляли 2 мл рабочего реагента (рас твор р-нитрофенилфосфата в 2-амино-2-метил-1-пропаноловый буфере (1:4)). Измеряли экстинкцию при 405 нм через 1, 2 и 3 минуты и рассчитывали среднее изменение экстинкции за 1 мин (АЕ/мин). Активность щелочной фосфатазы рассчитывалась по формуле: МЕ/л = 3456 хДЕ/мин. Уровень билирубина оценивался по методу Ван-ден-Берга при помощи диагностического набора Уйа1 ГЛа^позПсз 8РЬ. Образец сыворотки (0,2 мл) смешивали с 1,4 мл кофеинового реагента (52 шМ кофеина, 104 шМ натрия бензоата, 184 шМ натрия ацетата), 0,2 мл физиологического раствора и 0,2 мл диазореагента (смесь 29 шМ раствора сульфаниловой кислоты 72 шМ раствора натрия нитрита в соотношении 100:2,5) и инкубировали в течение 20 минут при 20°С при длине волны 535 нм. Уровень АлАТ и АсАТ оценивался при помощи метода Кейтап и Ргапке1 при помощи диагностического набора Био-ЛА-Тест. 0,05 мл плазмы крови помещали в 0,25мл инкубационной смеси (83 тМ фосфатного буфера (рН=7.4); 166 тМ ОЬ-апьфа-аланина; 1,7 тМ 2-оксоглутарата), инкубировали 60 мин 37°С, добавляли 0,25 мл раствора 2,4динитрофенилгидразина (1 шМ в 1М НС1), перемешивали и оставляли на 20 минут. Затем добавляли 0,25 мл раствора КаОН и через 10 минут определяли 79 |
80 В нашей лаборатории мы работаем с хроматографом БЫтабхи НРЬСЮАур (БЫтабги Со., Иск, Куою, ,1арап), оснащенным диодно-матричным детектором ЗРО-МЮА (ЗЫгганЗги Со., Ьк!., Куою, Зарап), инжектором КЬеосКпе модели 77251 с петлей ввода на 20 мкл (КЬеобупе, Со1аП, СА 94928) и хроматографической колонкой 8ире1со8П ЕС-8 (7.5ст х 4.6тт, средний размер частиц Зрш). Поэтому описываемая методика не подходила нам в полном объеме и потребовалась ее адаптация к имеющемуся оборудованию. 2.2 Оценка функционального состояния печени при жировом гепатозе. Оценка функционального состояния печени при жировом гепатозс осуществлялась с использованием определения в крови печеночноспецифических ферментов и маркеров функциональной активности печени, таких как АлАТ, АсАТ, ЩФ, уровень общего билирубина и тимоловой пробы. Уровень АнАТ и АсА Г оценивался при помощи метода Кейтаи и Ргайке! при помощи диагностического набора Био-ЛА-Тест. 0,05 мл плазмы крови помещали в 0,25мл инкубационной смеси (83 тМ фосфатного буфера (р! 1=7.4); 166 тМ ОЕ-альфа-аланина; 1,7 тМ 2оксоглутарата), инкубировали 60 мин 37°С, добавляли 0,25 мл раствора 2,4дииитрофенилгидразина (1 тМ в 1М НС1), перемешивали и оставляли на 20 минут. Затем добавляли 0.25 мл раствора N3014 и через 10 минут определяли оптическую плотность по сравнению со стандартным раствором при длине волны 500-530 нм. Уровень ЩФ оценивался по методу Веззеу и Ьо\лту при помощи диагностического набора Ольвекс Диагностикум. Образец плазмы крови (0,05 мл, не позднее 4 часов после забора) помещали в кювету спектрофотометра и добавляли 2 мл рабочего реагента (раствор р-питрофенилфосфата в 2-амино-2-метил-1-пропаноловый буфере (1:4)). Измеряли экстинкцию при 405 им через 1,2 и 3 минуты и рассчитывали среднее изменение экстинкции за 1 мин (АЕ/мин). Активность щелочной фосфатазы рассчитывалась по формуле: МЕ/л = 3456 х АЕ/мин. 81 Уровень билирубина оценивался по методу Ван-ден-Берга при помощи диагностического набора Упа! ЕНа^позбсз ЗРЬ. Образец сыворотки (0,2 мл) смешивали с 1,4 мл кофеинового реагента ($2 гпМ кофеина, 104 шМ натрия бензоата, 184 шМ натрия ацетата), 0,2 мл физиологического раствора и 0,2 мл диазореагента (смесь 29 шМ раствора сульфаниловой кислоты 72 гпМ раствора натрия нитрита в соотношении 100:2,5) и инкубировали в течение 20 минут при 20°С при длине волны 535 нм. Тимоловая проба. Проба основана на фотоколометрическом определении степени помутнения сыворотки крови после добавления к ней насыщенного раствора тимола. К 6 мл тимолово-вероналового буферного раствора прибавляют 0,1 мл сыворотки крови. Через 30 минут отстаивания измеряют оптическую плотность раствора, сопоставляя ее с оптической плотностью тимолововероналового буфера. В норме степень помутнения сыворотки соответствует 04 МЕ. 2.3 Состояние углеводного обмена Состояние углеводного обмена оценивалось комплексно но нескольким критериям: Показатели гликемии натощак, постпрандиальной гликемии и глюкозотолерантного теста, использовались для верификации диагноза СД. Показатели гликемии натощак, гликемии через 2 часа после приема пищи гликемии перед сном и гликированного гемоглобина, позволили оценить компенсацию углеводного обмена. Пероральный толерантный тест глюкозой (ПТТГ) проводили с нагрузкой 75 г глюкозы с определением уровней глюкозы крови натощак, а затем через 1 и 2 часа после углеводной нагрузки. Уровень глюкозы определяли в цельной капиллярной крови из пальца с помощью портативного глюкометра «Акку-Чек Гоу» («Рош», Г ермания) и тест полосок «Акку-Чек Гоу» («Рош», Германия). |