50 В сериях экспериментов с инъекцией перфторана препарат вводили внутрибрюшинно однократно в дозе 1 мл/ 100 г массы тела опытным и контрольным крысам через 8 часов от начала опыта. В обеих группах он не оказывал влияния на ректальную температуру. На 5-ый день после введения ПЛФ, апирогенного раствора или коррекции субфебрилитета перфтораном животных брали в острый опыт под общим обезболиванием. Для наркоза использовали этаминал натрия (внутримышечно в дозе 50 мг/кг массы тела). При выполнении исследований строго соблюдались правила апирогенной работы на всех этапах эксперимента. Для этого придерживались всех требований, предъявляемых к работе с пирогенами [136]. Лимфу для исследования получали путем прокола устья ГЛП крыс, кровь из нижней полой вены. Скорость лимфотока определяли по количеству миллилитров лимфы, выделившейся из ГЛП в течение 10 мин и выражали в мл на 100 г массы тела в сек. Эвтаназия животных проводилась внутримышечным введением летальной (трехкратной) дозы используемого наркотического вещества. 2.4. Методика изучения микролимфоциркуляции и параметров функционирования лимфангиома лимфатических микрососудов Микролимфоциркуляция, сократительная активность миоцитов стенки и створок клапанов, диаметр просвета и амплитуда вазомоций ЛМ брыжейки тонкой кишки крыс изучались в условиях витальной микроскопии. Особенность терминального русла брыжейки тонкой кишки прозрачность для света двухслойной соединительной ткани, однослойность сосудистых образований создают определенную доступность и удобство этого объекта. Кроме того, в большинстве опубликованных работ используется брыжейка крыс вследствие доступности, удобных размеров объекта для микроскопирования, притом, что структурно-функциональная организация ее микроциркуляторного русла близка к таковой у человека [153]. |
43 В качестве пирогена применяли экзогенный бактериальный эндотоксин ЛИС Salmonella typhi фармакопейный препарат пирогенал (серий 2070808, 106-1207 производство НИИ им. Н.Ф.Гамалея, Россия). ЛР воспроизводили однократным ежедневным внутримышечным введением препарата в дозе 100 мкг на 1 кг массы тела в течение трех и десяти дней. Во время опыта животные находились в условиях, не ограничивающих свободу движений. Контрольным животным тем же способом и в том же объеме вводили апирогенный раствор. В динамике ЛР измерения температуры тела проводили через каждые 30 мин в течение 7 час от начала введения пирогенала. Инъекция апирогенного раствора не влияла на ректальную температуру крыс. Введение ЛПС приводило к медленному повышению температуры тела животных. Проведенный анализ не выявил индивидуальных различий но изучаемому параметру. У всех крыс изменения температуры тела были однонаправленными и характеризовались отсутствием значимых различий выраженности в обследуемых группах животных. Уже через 30 мин от начала инъекции пирогенала регистрировалось достоверное повышение ректальной температуры на 0,43°±0,05°С. Через час она поднялась на 0,7°±0,09°С, а через 2 часа на 1,1°±0,11°С. Максимальный подъем температуры наблюдался через три часа и составил 1,8°±0,16°С, а общая продолжительность ЛР была 6 час (см. рис. 2.3.1.). На 4-ый день после трехкратного и 11-ый день после десятикратного введения ЛПС или апирогенного раствора животных брали в острый опыт иод общим1 обезболиванием. Для наркоза использовали этаминал натрия (внутримышечно в дозе 50 мг/кг массы тела). При выполнении исследований строго соблюдались правила апирогенной работы на всех этапах эксперимента. Для этого придерживались всех требований, предъявляемых к работе с пирогенами [126]. 44 -1,0 0,0 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 7,0 > Рис. 2.3.1. Ректальная температура крыс после однократного введения пирогенала (прямая линия) и апирогенного раствора (пунктирная линия). По оси абсцисс время, час, по оси ординат изменения ректальной температуры (At°C). ♦ Р< 0,001, • Р < 0,05. Лимфу для исследования получали путем прокола устья ГЛП крыс, кровь — из нижней полой вены. Скорость лимфотока определяли по количеству миллилитров лимфы, выделившейся из ГЛП в течение 10 мин и выражали в мл на 100 г массы тела в сек. Эвтаназия животных проводилась внутримышечным введением летальной (трехкратной) дозы используемого наркотического вещества. 2.4. Методика изучения микролимфоциркуляции и параметров функционирования лимфангиона лимфатических микрососудов Микролимфоциркуляция и сократительная активность миоцитов стенки и створок клапанов ЛМ брыжейки тонкой кишки крыс изучалась в условиях витальной микроскопии. Особенность терминального русла брыжейки тонкой кишки прозрачность для света двухслойной соединительной ткани, однослойность сосудистых образований создают определенную 1 45 доступность и удобство этого объекта. Кроме того, в большинстве опубликованных работ используется брыжейка крыс вследствие доступности, удобных размеров объекта для микроскопирования, притом, что структурно-функциональная организация ее микроциркуляторного русла близка к таковой у человека 1140]. При проведении острых опытов на брыжейке выбранная нами доза (50 мг/кг массы тела) и способ введения (внутримышечно) этаминала натрия позволяли свести к минимуму изменения микроциркуляции. В условиях глубокого наркоза (адекватность анестезии оценивали по частоте дыхания, ответу на сжатие лапы, зрачковому рефлексу) у крыс выстригали участок шерсти ■ на передней брюшной стенке. Животных помещали на термостатируемом столике (t°37°C) (рис 2.4.2), выделяли петлю тонкой кишки через срединный разрез брюшной стенки. Эвентрированную петлю тонкого кишечника с участком брыжейки, свободным от жировой клетчатки, осторожно расправляли и укладывали на световод, который с помощью микровинтов перемещался в вертикальной и горизонтальной плоскостях, что дает возможность выбирать для наблюдения необходимый участок брыжейки. Кишку обкладывали влажной марлевой салфеткой, смоченной теплым физиологическим раствором (рис 2.4.3). В течение всего опыта во избежание пересыхания брыжейка орошалась подогретым до 38°С апирогенным физиологическим раствором, который также использовали в качестве иммерсионной жидкости. Наблюдение и регистрацию параметров микролимфоциркуляции осуществляли через 15 мин после хирургических процедур (время, необходимое для уменьшения постоперационных изменений микроциркуляции). Описанные подготовительные процедуры и условия позволяют выполнять эксперименты с минимальным стрессом для животного.1 ’ ' Биомикроскопия брыжейки проводилась с помощью телевизионного микроскопа ТМ-1 ' в соответствии с требованиями, предъявляемыми к витальной микроскопии [140]. Экспериментальная установка была |