|
51 При проведении острых опытов на брыжейке выбранная нами доза (50 мг/кг массы тела) и способ введения (внутримышечно) этаминала натрия позволяли свести к минимуму изменения микроциркуляции. В условиях глубокого наркоза (адекватность анестезии оценивали по частоте дыхания, ответу на сжатие лапы, зрачковому рефлексу) у крыс выстригали участок шерсти на передней брюшной стенке. Животных помещали на термостатируемом столике (t°37°C) (рис 2.4.2), выделяли петлю тонкой кишки через срединный разрез брюшной стенки. Эвентрированную петлю тонкого кишечника с участком брыжейки, свободиым от жировой клетчатки, осторожно расправляли и укладывали на световод, который с помощью микровинтов перемещался в вертикальной и горизонтальной плоскостях, что дает возможность выбирать для наблюдения необходимый участок брыжейки. Кишку обкладывали влажной марлевой салфеткой, смоченной теплым физиологическим раствором (рис 2.4.3). В течение всего опыта во избежание пересыхания брыжейка орошалась подогретым до 38°С апирогенным физиологическим раствором, который также использовали в качестве иммерсионной жидкости. Наблюдение и регистрацию параметров микролимфоциркуляции осуществляли через 15 мин после хирургических процедур (время, необходимое для уменьшения постоперационных изменений микроциркуляции). Описанные подготовительные процедуры и условия позволяют выполнять эксперименты с минимальным стрессом для животного. Биомикроскопия брыжейки проводилась с помощью микроскопа «Люмам-Pl». Одновременно изображение с микроскопа предавалось с помощью цифровой видеокамеры на персональный компьютер. Использовали стандартную программу видеозахвата Adobe Premier 6.0, которая позволяет проводить покадровый анализ изображения. Полученные видеоизображения (файлы *.mpg или *.tiff) обрабатывали в обычном или покадровом режимах с помощью пакетов стандартного программного обеспечения (Adobe Premier 6.0). Данный метод позволяет проводить |
45 доступность и удобство этого объекта. Кроме того, в большинстве опубликованных работ используется брыжейка крыс вследствие доступности, удобных размеров объекта для микроскопирования, притом, что структурно-функциональная организация ее микроциркуляторного русла близка к таковой у человека 1140]. При проведении острых опытов на брыжейке выбранная нами доза (50 мг/кг массы тела) и способ введения (внутримышечно) этаминала натрия позволяли свести к минимуму изменения микроциркуляции. В условиях глубокого наркоза (адекватность анестезии оценивали по частоте дыхания, ответу на сжатие лапы, зрачковому рефлексу) у крыс выстригали участок шерсти ■ на передней брюшной стенке. Животных помещали на термостатируемом столике (t°37°C) (рис 2.4.2), выделяли петлю тонкой кишки через срединный разрез брюшной стенки. Эвентрированную петлю тонкого кишечника с участком брыжейки, свободным от жировой клетчатки, осторожно расправляли и укладывали на световод, который с помощью микровинтов перемещался в вертикальной и горизонтальной плоскостях, что дает возможность выбирать для наблюдения необходимый участок брыжейки. Кишку обкладывали влажной марлевой салфеткой, смоченной теплым физиологическим раствором (рис 2.4.3). В течение всего опыта во избежание пересыхания брыжейка орошалась подогретым до 38°С апирогенным физиологическим раствором, который также использовали в качестве иммерсионной жидкости. Наблюдение и регистрацию параметров микролимфоциркуляции осуществляли через 15 мин после хирургических процедур (время, необходимое для уменьшения постоперационных изменений микроциркуляции). Описанные подготовительные процедуры и условия позволяют выполнять эксперименты с минимальным стрессом для животного.1 ’ ' Биомикроскопия брыжейки проводилась с помощью телевизионного микроскопа ТМ-1 ' в соответствии с требованиями, предъявляемыми к витальной микроскопии [140]. Экспериментальная установка была 46 представлена микроскопом «Люмам-Р1», комплектом малогабаритной аппаратуры для магнитной записи телевизионных сигналов «ВМ ЛОМО403» (видеомагнитофон ВМ-403, видеоконтрольное устройство ВК 40В60), быстродействующим самопишущим прибором Н-320-3 и усилителем биопотенциалов. Проводилась запись сокращения стенки и смыкания створок клапанов ЛМ с помощью датчиков, которые крепились на экране видсоконтрольного устройства. Принцип регистрации сокращений основан на обнаружении различия оптической плотности стенки или клапана но сравнению с оптической плотностью окружающей ткани или просвета сосуда [6]. Кроме того, за состоянием лимфомикроциркуляции постоянно наблюдали на экране монитора. Одновременно изображение с микроскопа предавалось с помощью цифровой видеокамеры на персональный компьютер. Использовали стандартную программу видеозахвата Adobe Premier 6.0, которая позволяет проводить покадровый анализ изображения. Полученные видеоизображения (файлы *.mpg или *.tiff) обрабатывали в обычном или покадровом режимах с помощью пакетов стандартного программного обеспечения (Adobe Premier 6.0). Данный метод позволяет проводить прижизненную регистрацию параметров микролимфоциркуляции, не нарушая целостности сосуда с пространственным разрешением 0,3-0,5 мкм. Функциональное состояние ЛМ регистрировали в реальном времени в видимом свете. Общий вид установки для проведения биомикроскопии брыжейки тонкой кишки крысы представлен на рис. 2.4.4. Из параметров функционирования ЛМ определяли число лимфангионов с лимфотоком (%), количество лимфангионов, обладающих спонтанной сократительной активностью стенки (%), количество лимфангионов с работающим клапаном (%), количество сосудов с одновременным функционированием клапанов и стенки лимфангиона (%), диаметр ЛМ (в мкм), подсчитывали частоту фазных сокращений миоцитов стенки и смыкания створок клапана за 1 мин [6]. Измерения диаметра ЛМ производили во время диастолы в трех сечениях в центральной I |