Содержание триптофана в мясе определяли химическим методом Спайза и Чемберза (1949) в модификации Геллера (1958), который изложен в методике исследований по свиноводству (А.М. Поливода, Р.П. Стробыткина, М.Д. Любецкой, 1977). Содержание триптофана рассчитывали по формуле: X = (а х 100): в, где а содержание триптофана (мг%) в мясе, найденное по калибровочному графику; в навеска мяса (мг); 100 множитель перевода в проценты. Концентрацию других незаменимых аминокислот определяли методом ионообменной хроматографии с использованием автоматического аминокислотного анализатора «ААА 3», изложенным Л.В.Антиповой. И.А. ['лотовой, И.А. Роговым (2001). Для разделения аминокислот применили хроматофафическую колонку, заполненную катионообменной смолой, с последующим ступенчатым элюированием тремя натрий нитратными буферными растворами с различным значением рН (3,28; 4,25; 5,28). Для окрашивания элюата использовали нингидрин. Окрашенный раствор пропускали через спектрофотометр с длиной волны 570 им для измерения интенсивности окраски, которая фиксировалась самописцем в виде пиков. По расположению пиков судили о наличии индивидуальных аминокислот в гидролизате, а по площади пиков об их содержании. Для расчётов предварительно получали стандартную аминограмму с известным содержанием аминокислот. Площадь пиков вычисляли путем умножения высоты пика па его ширину, взятую на половине его высоты. Массовую долю аминокислот рассчитывали по формуле: X = (§„М х 50 х 10'3) / (ЗсШ), где Зп площадь пика соответствующей аминокислоты на полученной аминограмме, см"; М молекулярная масса аминокислоты, Да; 50 объем раствора, полученный после кислотного гидролиза, см1; Ю'3концентрация аминокислоты в стандартном растворе, моль/дм3; 84 |
100 коэффициент пересчета в проценты. Содержание оксипролина в мясе исследовали методом Неймана-Логана, в модификации Вербицкого и Деатерейджа (А.М. Поливода, М.Д. Любецким, 1977). Содержание оксипролина рассчитывали по формуле: X = С-100-100 п — е (6) где X концентрация оксипролина в исследуемом образце, мг%; С концентрация оксипролина в 10 мл окрашенного раствора, которая определяется по калибровочному графику, мг; 100 количество раствора, полученного после нейтрализации, мл; 100 множитель перевода в проценты; п количество раствора, взятого для цветной реакции; е навеска мяса, г. Определению оксипролина мешает аминокислота тирозин. Окраска тирозина составляет 1,3% окраски раствора, развиваемой оксипролином. Полная поправка с учетом окраски самого гидролизата составляет 0,082 единицы оптической плотности на 40 мг мяса в 1 мл гидролизата. Из полученной величины оптической плотности вычитали эту величину. Содержание триптофана в мясе определяли химическим методом Спайза и Чемберза (1949) в модификации Геллера (1958), который изложен в методике исследований по свиноводству (А.М.Поливода, Р.В. Стробыкина, М.Д.Любецкий; 1977). Содержание триптофана рассчитывали по формуле: а -100 X = (7) где а содержание триптофана (мг%) в мясе, найденное по калибровочному графику; в навеска мяса (мг); 100 множитель перевода в проценты. Концентрацию других незаменимых аминокислот определяли методом 54 ионнообменной хроматографии с использованием автоматического аминокислотного анализатора «ААА 3», изложенной Л.В. Антиповой, И.А. Глотовой, И.А. Роговым (2001). Для разделения аминокислот применили хроматографическую колонку, заполненную катионообменной смолой, с последующим ступенчатым эмопрованием_тремя натрий нитратными буферными растворами с различным значением рН (3,28; 4,25; 5,28). Для окрашивания эмоата использовали нингидрин. Окрашенный раствор пропускали через спектрофотометр с длиной волны 570 нм для измерения интенсивности окраски, которая фиксировалась самописцем в виде пиков. По расположению пиков судили о наличии индивидуальных аминокислот в гидролизате, а по площади пиков об их со* держании. Для расчетов предварительно получали стандартную аминограмму с известным содержанием аминокислот. Площадь пиков вычисляли путем умножения высоты пика на его ширину, взятую на половине его высоты. Массовую долю аминокислот рассчитывали по формуле: Х=(3„ М • 50 • 10'3)/($ст т), (8) где 8П площадь пика соответствующей аминокислоты на полученной аминограмме, см2; М молекулярная масса аминокислоты, Да; 50 объем раствора, полученный после кислотного гидролиза, см3; 10'3 концентрация аминокислоты в стандартном растворе, моль/дм3;; $стплощадь пика стандартного раствора аминокислоты, см2; т масса навески образца, г. При расчете аминокислот учитывали, что кислотный гидролиз разрушает полностью аминокислоту триптофан, на 5 10 % треонин, незначительно цистин, метионин. Содержание аминокислот в мышечной ткани и в мясе выражали в мг % на влажную массу ткани. Аминокислотный индекс (скор) белка мышечной ткани и мяса определяли по формуле: 55 |