59 Уровень зУСАМ-1 в крови определяли с помощью иммуноферментного анализа (ЗАО «БиоХимМак», Москва). Характеристика эндотелиальной функции включала определение количества десквамированных (циркулирующих) эндотелиальных клеток и содержания эндотелина-1 в крови обследованных. Количество десквамированных эндотелиоцитов в крови определяли по методу Н1ас1оуес .1. (1978) [154]. Метод основан на изоляции клеток эндотелия вместе с тромбоцитами с последующим осаждением тромбоцитов с помощью аденозиндифосфата (АДФ). Кровь из локтевой вены брали в количестве 5 мл в качестве стабилизатора добавляли 3,8% лимоннокислый натрий в соотношении 1:9. Для получения богатой тромбоцитами плазмы сразу после взятия кровь центрифугировали 10 мин при 200&. Затем 1 мл плазмы смешивали с 0,2 мл натриевой соли аденозиндифосфата (АДФ-Ыа) в концентрации 1 мг/мл. Полученную смесь механически перемешивали в течение 10 мин аккуратным встряхиванием пробирок, после чего вновь центрифугировали в прежнем режиме для удаления агрегатов тромбоцитов. Свободный от тромбоцитов супернатант переносили в другую емкость и центрифугировали при 200§ в течение 1$ мин для осаждения эндотелиальных клеток. Затем надосадочную плазму аккуратно удаляли, а полученный осадок суспендировали в 0,1 мл 0,9% раствора ЫаС1 и перемешивали стеклянной палочкой. Готовой суспензией заполняли камеру Горяева. Количество клеток эндотелия подсчитывали в 2 сетках камеры методом фазовоконтрастной микроскопии. Учитывая соотношение между количеством клеток в сетке и объемом камеры Горяева, объемом полученной суспензии и объемом плазмы, при подсчете количества эндотелиальных клеток результат умножали на Ю4/л. Образцы крови для последующего определения уровня эндотелина-1 отбирали в утренние часы (7.00-8.00) в охлажденные силиконовые пробирки с добавлением 2 мл 5% раствора трилона Б и центрифугировали при постоянном охлаждении со скоростью 6 тыс. оборотов в 1 мин в течение 3 мин. По |
56 Характеристика эндотелиальной функции включала определение количества десквамированных (циркулирующих) эндотелиальных клеток й содержания эндотелина-1 в крови обследованных. Количество десквамированных эндотелиоцитов в крови определяли по методу Н1ас1оуес 5. (1978) [135]. Метод основан на изоляции клеток эндотелия вместе с тромбоцитами с последующим осаждением тромбоцитов с помощью аденозиндифосфата (АДФ). Кровь из локтевой вены брали в количестве 5 мл в качестве стабилизатора добавляли 3,8% лимоннокислый натрий в соотношении 1:9. Для получения богатой тромбоцитами плазмы сразу после взятия кровь центрифугировали 10 мин при 200с. Затем 1 мл плазмы смешивали с 0,2 мл натриевой соли аденозиндифосфата (АДФ-Ыа) в концентрации 1 мг/мл. Полученную смесь механически перемешивали в течение 10 мин аккуратным встряхиванием пробирок, после чего вновь центрифугировали в прежнем режиме для удаления агрегатов тромбоцитов. Свободный от тромбоцитов супернатант переносили в другую ем кость и центрифугировали при 200& в течение 15 мишдля осаждения эндотелиальных клеток. Затем надосадочную плазму аккуратно удаляли, а полученный осадок суспендировали в 0,1 мл 0,9% раствора КаСГ и-первхмешивали стеклянной палочкой. Готовой суспензией заполняли камеру Горяева. Количество клеток эндотелия подсчитывали в 2 сетках камеры методом фазовоконтрастиой микроскопии. Учитывая соотношение между количеством клеток в сетке и объемом камеры Горяева, объемом полученной суспензии-и объемом 1 плазмы, при подсчете количества эндотелиальных, клеток результат умножали на 10‘Ул. Образцы крови для последующего определения уровня эндотелина-1 отбирали в утренние часы (7.00-8.00) в охлажденные силиконовые пробирки с добавлением 2 мл 5% раствора трилона Б и центрифугировали при постоянном охлаждении со скоростью 6 тыс. оборотов в 1 мин в течение 3 мин. После этого плазму крови немедленно замораживали и хранили при температуре не более 35 °С. Определение уровня эндотелина-1 в образцах проводили с помощью |