|
60 еле этого плазму крови немедленно замораживали и хранили при температуре не более -3$ °С. Определение уровня эндотелина-1 в образцах проводили с помощью оригинального набора для радиоиммунного анализа фирмы АтегзЬагп (США). Концентрацию СРБ в сыворотке крови определяли высокочувствительным иммуноферментным методом с использованием наборов 1ММ1ШТЕ АшЬ 8епыту СКР (ОМБ, Москва). Примечание: лабораторные исследования выполнялись в ЦНИЛ ФГУП Курская биофабрика фирма «БИОК», за что выражаем искреннюю благодарность сотрудникам лаборатории. 4.3. Методика определения эндотелийзависимой вазодилатации плечевой артерии Данная проба с созданием реактивной гиперемии предназначена для оценки ЭЗВД плечевой артерии путем определения прироста ее диаметра в ответ на механический стимул. Методика разработана в 1992 г. 0.8. Се1еппа]ег, модифицирована О.В. Ивановой с соавт. (1998) [67, 184]. Для оценки изменения диаметра плечевой артерии использовали линейный датчик 7,5 МГц ультразвукового аппарата «У1у1с1 3» (США). Плечевую артерию лоцировали в продольном сечении на 2-15 см выше локтевого сгиба, изображение синхронизировали с зубцом К ЭКГ. Исследование проводили в триплексном режиме (В-режим, цветное допплеровское картирование потока, спектральный анализ допплеровского сдвига частот), изображение записывали на видеокассету с помощью видеомагнитофона «Зопу 8УН5». Осуществляли измерение диаметра плечевой артерии в состоянии покоя. Затем на плечо накладывали манжету сфигмоманомстра (выше места визуализации плечевой артерии) и накачивали ее до давления, на 50 мм рт. ст. превышавшего систолическое артериальное давление, на 5 минут. Диаметр плечевой артерии определяли на 30-й, 60-й и 90-й секундах |
59 Для оценки системного иммунитета изучали уровень неоптерина и сывороточных цитокинов: ИЛ-ф, ИЛ-6, ФНО-а, ИЛ-2, ИЛ-8, ИФН-у, ИЛ4, ИЛ-10, ТФР-Р1. Исследование проводили при поступлении больных в стационар и после лечения (через 6 месяцев). Содержание в сыворотке крови ИЛ-ф, ИЛ-6, ФНО-а, ИЛ-2, ИФ-у, ИЛ-4, ИЛ-К), ТФР-р1 определяли методом твердофазно го иммуноферментного анализа с использованием тест систем Рго Соп Т1ЧР-СХ, Рго Соп 1Ь-1(3, Рго Соп 1Ь-6 , Рго Соп 1Ь-2, Рго Соп Ш-8, Рго Соп 1РГЧ-у, Рго Соп 1Ь-4, Рго Соп 1Ь-10, (НОО«Г1ротеиновый контур», г.Санкт-Петербург) согласно инструкциям к тест системам. Неоптерин в крови определяли методом иммуноферментного анализа (ВКАЫМ8, Германия). Характеристика эндотелиальной функции включала определение количества десквамированных (циркулирующих) эндотелиальных клеток и содержания эндотелина-1 в крови обследованных. Количество десквамированных эндогелиоцитов в крови определяли по методу (И1ас1оуес I., 1978). Метод основан на изоляции клеток эндотелия вместе с тромбоцитами с последующим осаждением тромбоцитов с помощью аденозипдифосфата (ЛДФ). Определение уровня эндотелина-1 в образцах проводили с помощью набора для радиоиммунного анализа фирмы ЛтегзЬат (США). Для определения ТФР-Рт использовали сыворотку пациентов, хранившуюся при -70°С до проведения исследования. После ацидификации сыворотки, концентрацию биологически активной формы ТФР-Р* определяли иммуноферментным методом (АтегзЬат РЬагтасла Вю(есЬ). Чувствительность метода 4 пг/мл. Примечание: исследования иммунного статуса выполнялись в ЦНИЛ ФГУП Курская биофабрика фирма «БИОК», за что выражаем искреннюю благодарность сотрудникам лаборатории. 5.3. Методика определения эндотелийзависимой вазодилатации плечевой артерии 60 Данная проба с созданием реактивной гиперемии предназначена для оценки ЭЗВД плечевой артерии путем определения прироста ее диаметра в ответ на механический стимул. Методика разработана в 1992 г. 0.8. Се1егта)ег, модифицирована У. Нйоока с соавторами (1994), О.В. Ивановой с соавторами (1998). Для оценки изменения диаметра плечевой артерии использовали линейный датчик 7,5 МГц ультразвукового аппарата "Ут^шеё СМР 800" (США). Плечевую артерию лоцировали в продольном сечении на 2-15 см выше локтевого сгиба, изображение синхронизировали с зубцом К ЭКГ. Исследование проводили в триплексном режиме (В-режим, цветное допплеровское картирование потока, спектральный анализ допплеровского сдвига частот). Осуществляли измерение диаметра плечевой артерии в состоянии покоя. Затем на плечо накладывали манжету сфигмоманометра (выше места визуализации плечевой артерии) и накачивали ее до давления, на 50 мм рт. ст. превышавшего систолическое артериальное давление, на 5 минут. Диаметр плечевой артерии определяли на 30-й, 60-й и 90-й секундах после удаления воздуха из манжеты. Изменения диаметра сосуда на 60-й секунде оценивали в процентном отношении к исходной величине. Эндотелийнезависимую вазодилатацию оценивали по описанной выше методике через 5 минут после приема пациентом 500 мкг нитроглицерина сублингвально. Определяли следующие параметры: Диаметр плечевой артерии с1 (см): исходный б0; при компрессии бь при реактивной гиперемии сЬ; при приеме нитроглицерина б3. Скорость кровотока в плечевой артерии V (см/сек): исходную У0; при реактивной гиперемии У2. Производили расчет следующих показателей: Степень изменения диаметра плечевой артерии Дс1 (%): при компрессии Дбо^^о-бО^ПОО/бо; при реактивной гиперемии Д(1о2=(с1о-с1?.)* 100/бо; при приеме нитроглицерина Дс10з=(бо-с1з):,: Ю0/бо. Степень изменения скорости кровотока в плечевой артерии ДУ (%): при реактивной гиперемии ДУог'СУо-Уз)* ЮО/Уо |