|
39 лаборатории ЦНИИ Эпидемиологии с использованием тест-системы «АмплиСенс HCV-240/BKO-440» (ЦНИИЭ, Москва). Генотипирование вируса гепатита С проводилось до лечения с помощью коммерческой тест-системы «АмплиСенс HVC-генотйп» (ЦНИИЭ, Москва). В основе принципа геиотипирования лежит амплификация с праймерами, специфичными для разных генотипов. 2.4. Исследование показателей системы иммунитета Исследование показателей системы иммунитета проводилось в лаборатории иммунодиагностики и иммунокоррекции ГУ НИИ трансплантологии органов и тканей под руководством проф., д.б.н. Малиновской В.В. Количество лейкоцитов подсчитывалось в камере Горясва, количество нейтрофилов и лимфоцитов в мазке венозной крови, окрашенном гематоксилин-эозином. Определяли количественные и функциональные показатели клеточного и гуморального иммунитета, иммунорегуляторного звена, системы фагоцитов, готовность клеток к апоптозу, что позволяло в течение 1-2 суток получать необходимую информацию, важную для своевременного проведения иммунокоррегирующей терапии . В работе использовали метод двухцветной проточной лазерной цитомерии для определения прогцентного и абсолютного содержания субпопуляций лимфоцитов. При оценке клеточного звена иммунитета определяли количество лимфоцитов, СЭЗЧлимфоцитов, их иммунорегуляторных субпопуляций, Тхелперов (CD4‘ioi.) и цитотоксических CD8 ^-лимфоцитов, иммунорегуляторный индекс (ИРИ соотношение CD4/CD8), а также содержание естественых киллеров (CD16+ici.-NK.), моноцитов (CD14+icn.), количество CD95+ клеток, экспрессирующих маркер FAS/АРО-АГ на проточном цитофлюориметре FACScan фирмы Backman Dickinson (США), оборудованном 488нм лазером (Enterpraise 621, Coherent Inc., США). |
50 До лечения, каждые 6 месяцев, при окончании терапии и в те же интервалы катамнеза больным определяли уровень гормонов щитовидной железы (Т3свободный, Т4свободный), тиреотропного гормона (ТТГ) и аутоиммунных антител (ANA антинуклеарные антитела, АМА анти митохондриальные антитела). 2.3 Специфическая диагностика вирусного гепатита у больных. Сыворотки крови всех больных исследовали на специфические маркеры вирусных гепатитов В, С, Д в лаборатории I (НИИЭ методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) (ELISA-тест) на спектрофотометре «Multiscan Rc» («Labsystems», Финляндия) РНК вируса гепатита С определялась в сыворотке крови и у 12 пациентов в ткани печени методом полимеразной цепной реакции в лаборатории ЦНИИ Эпидемиологии с использованием тест-системы «АмплиСенс HCV-240/BKO-440» (ЦНИИЭ, Москва). Генотипирование вируса гепатита С проводилось до лечения с помощью коммерческой тест-системы «АмплиСенс HVC-генотип» (ЦНИИЭ, Москва). В основе принципа генотипирования лежит амплификация с праймерами, специфичными для разных генотипов. 2.4 Определение состояния системы интерферона и цитокинов. Исследование показателей системы интерферона и цитокинов проводилось в лаборатории онтогенеза и коррекции системы интерферона ГУ НИИ Эпидемиологии и Микробиологии им.Н.Ф. Гамалеи под руководством проф., д.б.н. Малиновской В.В. Уровень синтеза ИФН-а и цитокинов учитывали методом иммуноферментного анализа (ELISA) с использованием тест-системы «Протеиновый контур» (г.Санкт-Петербург), ИФН-у также методом ИФА с использованием тест-системы «Biosourse» (США). Определялось количество сывороточного, спонтанного ИФН, уровень продукции лейкоцитами периферической крови ИФН-а, ИФН-у при 50 |