|
(30-45 минут) и последующая отмывка буферным раствором установленное количество раз (3-5). VI этап добавление раствора, развивающего окраску (реагент (ТМБ) + субстрат (Н2О2)), инкубация при комнатной температуре до 30 минут. После внесения смеси субстрата и реагента наблюдение за развитием голубой окраски. VII этап — при достижении требуемой величины оптической плотности стандартов добавляется стоп-раствор (H2S04) и производится считывание результатов при длине волны 450 нм. Стандартная кривая показывает зависимость между оптической плотностью и концентрацией цитокина в контрольном образце и рассчитывается с использованием формулы 4-х параметрического анализа. 2.6. Морфологическая характеристика поражения печени у больных Для оценки степени активности воспалительного процесса в печени, определения стадии процесса, а также с целью выявления РНК ВГС в ткани печени методом ПЦР проводилась пункционная биопсия печени. Степень морфологических изменений в печени оценивалась в соответствии с индексом Knodell, определяющим ИГА (индекс гистологической активности), предложенный R.G.Knodell с соавторами в 1981г. Учитывали в баллах следующие морфологические компоненты хронического гепатита: 1-й перипортальные некрозы гепатоцитов, включая мостовидные, от 0 до 10 баллов; 2-й внутри дольковые моноцеллюлярные некрозы и дистрофия гепатоцитов от 0 до 4 баллов; 3-й воспалительный инфильтрат в портальных трактах от 0 до 4 баллов; 4 -й фиброз от 0 до 4 баллов. Количество баллов от 1 до 3 характерно для “минимального” хронического гепатита, 4 8 для “слабовыраженного” (мягкого), 9 12 для “умеренного”, а 13 -18 для “тяжелого” ХГ (табл.2.7.). 43 |
внесения смеси субстрата и реагента наблюдение за развитием голубой окраски. VII этап при достижении требуемой величины оптической плотности стандартов добавляется стоп-раствор (H2SO4) и производится считывание результатов при длине волны 450 нм. Стандартная кривая показывает зависимость между оптической плотностью и концентрацией ИФ11-а (ИФНу, цитокин) в контрольном образце и рассчитывается с использованием формулы 4-х параметрического анализа. 2.5. Морфологическая характеристика поражения печени у больных. Для оценки степени активности воспалительного процесса в печени, определения стадии процесса, а также методом ГПДР с целью выявления РНК ВГС в ткани печени проводилась пункционная биопсия печени. Степень морфологических изменений в печени оценивалась в соответствии с индексом Knodell, определяющим ИГА (индекс гистологической активности), предложенный R.G.Knodell с соавторами в 1981г. Учитывали в баллах следующие морфологические компоненты хронического гепатита: 1-й псрипортальные некрозы гепатоцитов, включая мостовидные, от 0 до 10 баллов; 2-й внутридольковые моноцеллюлярныс некрозы и дистрофия гепатоцитов от 0 до 4 баллов; 3-й воспалительный инфильтрат в портальных трактах от 0 до 4 баллов; 4 -й фиброз от 0 до 4 баллов. Количество баллов от 1 до 3 характерно для “минимального” хронического гепатита, 4 8 для “слабовыраженного” (мягкого), 9 12 для “умеренного”, а 13 18 дня “тяжелого” ХГ (табл.2.5.). В начале исследования морфологически1/диапюз был подтвержден у 12 пациентов. Повторная пункционная биопсия печени была выполнена через 12 месяцев после окончания лечения с целью определения эффективности противовирусной терапии у 1 пациента. Морфологическое исследование ткани печени проводилось в 53 53 патологоанатомическом отделении ИКБ №2. |