|
4.3.1.2 Определение кислой фосфатазы. Определение кислой фосфотазы прооводилось биохимическим методом с помощью наборов Ольвекс Диагностикум. Костная кислая фосфатаза изофермент кислых фосфатаз, продуцируемый активными остеокластами и секретируемый ими в высоких концентрациях в микросреду между клеточной мембраной и костным матриксом. Как предполагают, костная КФ участвует в процессе деминерализации кости, а потому по уровню ее активности в крови, куда она частично попадает из зоны резорбции, считается возможным судить об интенсивности остеокластической резорбции. Принцип метода следующий: Кислая фосфатаза п-Нитрофенилфосфат + Н20 --------------------------->п-Нитрофенол + фосфат Количество образовавшегося в единицу времени п-нитрофенола, пропорциональное активности фермента, определяется по оптической плотности образца при 405 нм. При обработке плазмы крови тартратом (солями винной кислоты) костная КФ, в отличие от других ее изоферментов (в частности, простатической КФ), сохраняет активность, что позволяет адекватно оценить степень активности остеокластов. По полученным значениям строился график зависимости экстинции от активности фермента. Из экстинции общей активности вычиталась экстинция холостой пробы полученная разница соответствовала общей активности фермента. Из экстинции тартратстабильной активности вычиталась экстинция холостой пробы полученная разница соответствовала тартратстабильной активности фермента. Разница общей активности и тартратстабильной активности соответствовала активности тартратлабильной фракции. Нормальные величины: общая активность 67-167 нмоль/(с х л) \ |
Рисунок 1. Образец калибровочной кривой при определении Cross-laps в моче Концентрация Cross-laps Согласно данным фирмы производителя предел чувствительности 50 мкг/л. Норма 49-460 мкг/ммоль креатинина. 4.3.1.2 Определение кислой фосфатазы. Определение кислой фосфотазы прооводилось биохимическим методом с помощью наборов Ольвекс Диагностикум. Костная кислая фосфатаза изофермент кислых фосфатаз (КФ), продуцируемый активными остеокластами и секретируемый ими в высоких концентрациях в микросреду между клеточной мембраной и костным матриксом. Как предполагают, костная КФ участвует в процессе деминерализации кости, а потому по уровню ее активности в крови, куда она частично попадает из зоны резорбции, считается возможным судить об интенсивности остеокластической резорбции (7,48). Принцип метода следующий: Кислая фосфатаза п-Нитрофенилфосфат + вода -----------> п-Нитрофенол + фосфат Количество образовавшегося в единицу времени пнитрофенола, пропорциональное активности фермента, определяется по оптической плотности образца при 405 нм. При обработке плазмы крови тартратом (солями винной кислоты) костная КФ, в отличие от других ее изоферментов (в частности, простатической КФ), сохраняет активность, что позволяет адекватно оценить степень активности остеокластов. По полученным значениям строился график зависимости экстинции от активности фермента. Из экстинции общей активности вычиталась экстинция холостой пробы полученная разница соответствовала общей активности фермента. Из экстинции тартратстабильной активности вычиталась экстинция холостой пробы полученная разница соответствовала тартратстабильной активности фермента. Разница общей активности и тартратстабильной активности соответствовала активности тартратлабильной фракции. Нормальные величины: общая активность 67-167 нмоль/(с х л) тартратлабильняя фракция 0-16,7 нмоль/(с х л) Если полученная величина активности общей кислой фосфатазы превышала 800 нмоль/(с х л), то время инкубации сокращалось до 10 мин и полученный результат умножался на 3. |