Проверяемый текст
Баракат, Ахмад М. Али; Клинико-патогенетическое значение антител к коллагену I типа в развитии остеопороза при ревматоидном артрите (Диссертация 2005)
[стр. 63]

остеокальцина по 10 мл в равных объемах обоих растворов.
Далее вносилось по 20 мкл стандартов (A-F), контролей (СО) и образцов в соответствующие ячейки, затем добавлялось по 150 мкл предварительно приготовленной смеси растворов антител.
Стандарты это готовые буферы с белковым стабилизатором, консервантом и с разной концентрацией синтетического человеческого остеокальцина: А= 0 нг/мл, В=6,7 нг/мл, С=8,1 нг/мл, D=12,8 нг/мл, Е=33,3 нг/мл, F=117,0 нг/мл.
Контроль СО это раствор синтетического человеческого остеокальцина с белковым стабилизатором и консервантом.
Стрипы заклеивались пленкой и инкубировались 120±5 мин при комнатной температуре (18-22°С) без встряхивания.
После этого стрипы 5 раз промывались отмывающим буфером, разбавленным 1:50 дистиллированной водой.
Ячейки полностью осушались перед каждым циклом промывки.
Затем производилась инкубация с хромогенным субстратом.
Внесилось 100 мкл раствора субстрата в каждую ячейку и инкубировалось 15 ±2 мин в темноте при комнатной температуре (18-22°С) без встряхивания, предварительно заклеив стрипы пленкой.
После этого шла остановка цветной реакции, путем добавлялось по 100 мкл раствора 3N
НС1.
Далее измерялась оптическая плотность в течение двух часов при 450 нм Расчет результатов производился следующим образом.
Рассчитывались средние значения для дублей оптических плотностей за вычетом среднестатистической плотности для стандарта А.
Затем строилась кривая, где по оси ординат
откладывались скорректированные оптические плотности пяти стандартов (B-F), против соответствующих концентрации остеокальцина по оси абсцисс.
Интерполяцией определясь концентрация остеокальцина контролей и образцов пациентов.

Харатеристики метода следующие:
[стр. 88]

последовательности.
Смешивался коньюгат моноклональных антител против N-терминального отрезка остеокальцина с пероксидазой и биотинилированные моноклональные антитела против mid-отрезка остеокальцина по 10 мл в равных объемах обоих растворов.
Далее вносилось по 20 мкл стандартов (A-F), контролей (СО) и образцов в соответствующие ячейки, затем добавлялось по 150 мкл предварительно приготовленной смеси растворов антител.
Стандарты это готовые буферы с белковым стабилизатором, консервантом и с разной концентрацией синтетического человеческого остеокальцина: А= 0 нг/мл, В=6,7 нг/мл, С=8,1 нг/мл, D=12,8 нг/мл, Е=33,3 нг/мл, F=117,0 нг/мл.
Контроль СО это раствор синтетического человеческого остеокальцина с белковым стабилизатором и консервантом.
Стрипы заклеивались пленкой и инкубировались 120±5 мин при комнатной температуре (18-22°С) без встряхивания.
После этого стрипы 5 раз промывались отмывающим буфером, разбавленным 1:50 дистиллированной водой.
Ячейки полностью осушались перед каждым циклом промывки.
Затем производилась инкубация с хромогенным субстратом.
Внесилось 100 мкл раствора субстрата в каждую ячейку и инкубировалось 15 ±2 мин в темноте при комнатной температуре (18-22°С) без встряхивания, предварительно заклеив стрипы пленкой.
После этого шла остановка цветной реакции, путем добавлялось по 100 мкл раствора 3N
HCI.
Далее измерялась оптическая плотность в течение двух часов при 450 нм.
Расчет результатов производился следующим образом.
Рассчитывались средние значения для дублей оптических плотностей за вычетом среднестатистической плотности для стандарта А.
Затем строилась кривая, где по оси ординат


[стр.,89]

откладывались скорректированные оптические плотности пяти стандартов (B-F), против соответствующих концентраций остеокальцина по оси абсцисс.
Интерполяцией определясь концентрация остеокальцина контролей и образцов пациентов.

Рисунок 2.
Образец калибровочной кривой при определении остеокальцина 2.5 2 1.5 о .
О ш 1 0,5 0 Н-----------------------------------1------------------------------------1-------------------------------------1-------------------------------------1------------------------------------1------------------------------------1 0 110 275 825 2475 7425 Концентрация остеокальцина Характеристики метода следующие: Согласно данным фирмы производителя предел детекции : 0.5 нг/мл эта концентрация соответствует двум стандартным отклонениям от среднего значения 20-ти определений бланка.
Норма 8,8-37,6 нг/мл.
4.3.2.2 Определение щелочной фосфатазы Определение щелочной фосфотазы производилось биохимическим методом с помощью набора Lachema.
Костная щелочная фосфатаза (КЩФ) продуцируется остеобластами, и ее

[Back]