|
Производилось определении каталитической концентрации щелочной фосфатазы в сыворотке крови методом константного времени. Принцип метода следующий. Щелочная фосфатаза (щелочная фосфогидролаза моноэстеров ортофосфорной кислоты, К.Ф. 3.1.3.1.) расщепляет в N-метил— D-глюкаминовом буфере 4-нитрофенилфосфат с образованием 4нитрофенола и фосфата. ЩФ активирована хлоридом натрия. Мерой каталитической концентрации фермента является количество освобожденого 4-нитрофенола, который определяют фотометрически методом постаянного времени после остановки ферментативной реакции ингибитором' ЩФ, который блокирует активный центр фермента. Нормальные величины: мужчины 0,90-2,3 мккат/л, женщины 0,74-2,1 мккат/л. Методом константого времени можно без разведения анализировать пробы до 7 мккат/л. При каталитической концентрации ЩФ, превышающей эти величины, пробы разводились физиологическим раствором и анализ производился повторно (результат х разведение). Величины ЩФ можно пересчитать на температуру ЗО'С с помощью фактора 0,70. Пересчет единиц 1 кат/л = 1 моль/л с 1мккат/л = 60 Е/л. 4.4. Иммунологические методы. Иммуноферментное определение Среактивного белка в сыворотке крови. С-реактивный белок является пентамерным белком с молекулярной массой около 100 кДа. СРВ является одним из наиболее эволюционно древних факторов врожденного гуморального иммунитета. СРВ обладает высоким сродством ко многим внутренним антигенам —фосфаэтаноламину, фосфорилхолину, гистонам, фибронектину, ламинину и поликатионным соединениям. СРВ способен связывать полисахариды клеточных стенок стрептококков и стафилококков, принимает участие в очистке плазмы от остатков апоптотических и некротически погибших клеток, усиливая их |
синтез возрастает при активации дифференцировки этих клеток, происходящей в условиях ускоренного костеобразования. Предполагают, что КЩФ участвует в формировании и минерализации остеоида костного матрикса и что ее действие осуществляется при участии кальцитриола (7). Производилось определении каталитической концентрации щелочной фосфатазы в сыворотке крови методом константного времени. Принцип метода следующий. Щелочная фосфатаза (щелочная фосфогидролаза моноэстеров ортофосфорной кислоты, К.Ф. 3.1.3.1. ЩФ) расщепляет в Ы-метил-Оглюкаминовом буфере 4-нитрофенилфосфат с образованием 4нитрофенола и фосфата. ЩФ активирована хлоридом натрия. Мерой каталитической концентрации фермента является количество освобожденого 4-нитрофенола, который определяют фотометрически методом постаянного времени после остановки ферментативной реакции ингибитором ЩФ, который блокирует активный центр фермента. Нормальные величины: мужчины 0,90-2,3 мккат/л, женщины 0,74-2,1 мккат/л. Методом константого времени можно без разведения анализировать пробы до 7 мккат/л. При каталитической концентрации ЩФ, превышающей эти величины, пробы разводились физиологическим раствором и анализ производился повторно (результат х разведение). Величины ЩФ можно пересчитать на температуру ЗО'С с помощью фактора 0,70. Пересчет единиц 1 кат/л = 1 моль/л с 1 мккат/л = 60 Е/л. 4.4. Общеклинические и лабораторные методы исследования. Эффективность лечения больных оценивалась с помощью клинико-лабораторных и иммунобиохимических показателей, |